[发明专利]一种用于肿瘤电场作用后细胞增殖检测的方法

说明书

本发明大体涉及生物医疗技术领域，具体而言，涉及一种用于肿瘤电场作用后细胞增殖检测的方法。该方法包括：将电场处理后的细胞直接在培养基存在的条件下与CCK‑8试剂共孵育以检测细胞增殖能力，且检测过程中不添加胰酶进行消化处理。该方法不仅降低了实验批间内的误差，且避免了实验操作过程中活细胞的丢失、减少了胰酶试剂等成本，简化了实验流程。

技术领域

本发明大体涉及生物医疗技术领域，具体而言，涉及一种用于肿瘤电场作用后细胞增殖检测的方法。

背景技术

肿瘤电场治疗(TTFields)是一种新型的肿瘤治疗方法，它通过体外贴敷式电极片，向体内病灶传递中频(100-300kHz)、低场强(1-3V/cm)的交变电场，破坏处于快速分裂状态的肿瘤细胞，是一种便携、有效、低副反应的新型治疗方式。TTFields代表了一种新的治疗方法，已经被FDA批准用于新诊断的胶质母细胞瘤和复发性胶质母细胞瘤等。

在评价肿瘤电场治疗的效果时，细胞增值检测是最常用的方法之一。CCK-8是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测试剂，灵敏度高，数据可靠，操作简单。CCK-8细胞增值检测试剂盒含有WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)，在电子载体存在的情况下WST-8被细胞内脱氢酶氧化还原后生成水溶性的橙黄色甲臜染料能够溶解在组织培养基中，生成的甲臜量与活细胞数量成正比。

然而，现有的肿瘤电场作用后细胞增殖效果的CCK-8检测方法常常存在检测不准、变异系数较大的问题。

发明内容

将细胞消化制成混悬液再进行操作是本领域技术人员极为惯常使用的操作，在此过程中，需要预先采用胰酶对细胞进行消化。对于CCK-8细胞增殖检测而言，即伴随着上述过程，胰酶的消化是其必须步骤。这是因为贴壁生长的细胞通常会互相堆积，若不进行消化，将难以使细胞与CCK-8检测试剂均匀接触。因此，市售的CCK-8检测试剂盒的说明书中，都指导了需要对细胞需要效果并制备为悬液。

对于常规细胞的检测，这并不会造成太大问题，并且确实也能够提升检测的效率。且因上述操作过于常规，通常并不会为本领域技术人员所察觉。但是，本发明的发明人意外发现，对于电场处理后的细胞而言，胰酶的效果过程可能会带来很大的坏处。电场处理后的细胞，由于其细胞活力本身处于较低水平，此时再叠加胰酶刺激会导致测量结果出现很大的波动，且影响检测结果的准确性。

由此，本发明对现有技术进行了改进，本发明具体涉及一种用于肿瘤电场作用后细胞增殖检测的方法，包括：

将细胞均匀负载于片状固相载体上，电场处理后直接在培养基存在的条件下与CCK-8试剂共孵育以检测细胞增殖能力，且检测过程中不添加胰酶进行消化处理。

在胰酶消化过程中，若胰酶消化时间、用量等控制不当，则会导致细胞碎片增多，成片脱落，影响细胞活性，反复吹打本身也会对细胞活性造成影响。本发明所提供的方法，认识到了上述过程对电场处理后细胞活性检测所造成的阻碍，因而有效避免了上述不利情况，不仅降低了实验批间内的误差，且避免了实验操作过程中活细胞的丢失、减少了胰酶试剂等成本，简化了实验流程。

具体实施方式

现将详细地提供本发明实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本发明。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本发明进行多种修改和变化而不背离本发明的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。

除非另有说明，用于披露本发明的所有术语(包括技术和科学术语)的意义与本发明所属领域普通技术人员所通常理解的相同。通过进一步的指导，随后的定义用于更好地理解本发明的教导。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。