[发明专利]一种高通量的总RNA提取试剂盒及提取方法

说明书

本发明公开了一种高通量的总RNA提取试剂盒，包括研磨材料、裂解液、绑定液、漂洗液1、漂洗液2和洗脱液；其中，所述研磨材料为钢珠；所述裂解液包括异硫氰酸胍，甘油，十二烷基硫酸钠，醋酸钠以及水饱和酚；所述绑定液包括氯化钠和乙醇；所述漂洗液1包括盐酸胍和乙醇；所述漂洗液2包括三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和乙醇；所述洗脱液为无核酸酶水。该试剂及方法适配各类磁棒法全自动化核酸提取设备，具有高通量、高性价比等特点，能够大幅减少人工操作步骤，对于材质坚韧坚硬、RNA含量较低的组织、数量较少的分选细胞等类型复杂的样本，该方法体系RNA提取得率高、完整性好。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种高通量的总RNA提取试剂盒及提取方法。

背景技术

核糖核酸(RNA)是生物体内重要的有机聚合物，其参与遗传信息编码、解码，基因表达与调控等重要生命进程，RNA与脱氧核糖核酸(DNA)都属于核酸，后者是生物遗传信息的重要载体。核酸与脂质、蛋白质及碳水化合物是已知有机体中四类维持生命必要的生物大分子。RNA广泛存在于各类动植物、细菌甚至病毒中，在细胞中RNA作为一类组成型的分子发挥着各式各样的功能，不同种类的RNA参与到细胞内各类代谢过程中，其主要功能包括协助完成遗传信息从DNA到蛋白质的传递，指导核糖体根据遗传编码选择正确的氨基酸进行蛋白质合成，蛋白质合成时携带氨基酸进行多肽聚合反应等。

RNA提取是从细胞或组织中分离各种类型的RNA的过程，它是基于核酸层面的检测技术的重要组成部分，其在基因表达谱研究、病原体检测分型等领域至关重要，必须具备准确可靠、快速便捷、结果可复现等要求。传统的RNA提取方法根据裂解方式分类有异硫氰酸胍裂解法、热酸酚法、碱裂解法及十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法等，根据RNA的纯化方式，可以分为柱式纯化、磁珠纯化、醇沉淀法等。随着产业发展，商品化RNA提取试剂盒广泛应用到分子诊断、二代测序等研究场景中，提供适配多种样本类型、涵盖全套试剂的RNA提取实验流程，其优点是性能稳定，结果可控，流程成熟，不足的方面在于比较依赖熟练的人工操作，成本较高，且多数商品化RNA提取试剂盒采用柱式纯化的方式，其样本处理通量受到较大限制。另外随着产业对检测通量要求不断提升，市面上也出现多类自动化核酸提取仪，能够更大限度地替代人工操作完成绝大部分RNA提取实验步骤，从而使样本处理通量得到极大提升，同时获得准确可靠的检测结果，然而现阶段自动化核酸提取仪封闭性较高，特定的设备大多需要匹配的提取试剂，且适配样本类型相对比较单一，如外周血、拭子、唾液等，对于某些较难处理的样本类型，如富含消化酶的胰腺组织、质地坚韧不易裂解的皮肤组织、形态坚硬核酸含量较低的骨组织，以及数量较少的分选细胞等，其提取质量、提取得率往往不甚理想。

因此，有必要开发一种适配市面上多类磁棒法全自动化核酸提取设备，兼容细胞和各类复杂动物组织类型，提取的RNA得率高、完整性好的RNA提取方法，使其操作快捷简便，结果准确稳定，能更好地适应二代测序产业、分子检测等领域样本量大、检测周期短的场景。

发明内容

针对目前所存在的技术问题，本发明的目的在于提供一种高通量的总RNA提取试剂盒及提取方法。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术手段：

本发明的第一方面在于提供一种高通量的总RNA提取的试剂盒，所述试剂包括研磨材料、裂解液、绑定液、漂洗液1、漂洗液2和洗脱液；

其中，所述研磨材料为钢珠；

所述裂解液包括异硫氰酸胍，甘油，十二烷基硫酸钠，醋酸钠以及水饱和酚；

所述绑定液包括氯化钠和乙醇；

所述漂洗液1包括盐酸胍和乙醇；

所述漂洗液2包括三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和乙醇；

所述洗脱液为无核酸酶水。

进一步地，所述研磨材料为经过无核酸酶处理过的钢珠，所述钢珠为直径不同的混合钢珠。