[发明专利]一种高通量的总RNA提取试剂盒及提取方法

权利要求书

1.一种高通量的总RNA提取的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括研磨材料、裂解液、绑定液、漂洗液1、漂洗液2和洗脱液；

其中，所述研磨材料为钢珠；

所述裂解液包括异硫氰酸胍，甘油，十二烷基硫酸钠，醋酸钠以及水饱和酚；

所述绑定液包括氯化钠和乙醇；

所述漂洗液1包括盐酸胍和乙醇；

所述漂洗液2包括三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和乙醇；

所述洗脱液为无核酸酶水。

2.根据权利要求1所述的一种高通量的总RNA提取的试剂盒，其特征在于，所述研磨材料为经过无核酸酶处理过的钢珠，所述钢珠为直径不同的混合钢珠。

3.根据权利要求1所述的一种高通量的总RNA提取的试剂盒，其特征在于，所述裂解液中，异硫氰酸胍的终浓度1-5mol/L，甘油的终浓度1-5％，十二烷基硫酸钠的终浓度0.1-0.5％，醋酸钠的终浓度0.1-0.5mol/L以及水饱和酚的终浓度10-50％。

4.根据权利要求1所述的一种高通量的总RNA提取的试剂盒，其特征在于，所述绑定液中氯化钠的终浓度0.1-0.5mol/L，乙醇的终浓度50-85％。

5.根据权利要求1所述的一种高通量的总RNA提取的试剂盒，其特征在于，所述漂洗液1中盐酸胍的终浓度1-5mol/L和乙醇的终浓度50-85％。

6.根据权利要求1所述的一种高通量的总RNA提取的试剂盒，其特征在于，所述漂洗液2中三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的终浓度10-15mmol/L和乙醇的终浓度50-85％。

7.一种利用权利要求1-6任一项所述的高通量的总RNA提取的试剂盒进行RNA提取的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1，样本处理

在容器a中加入研磨材料，加入待测样本，根据待测样本量加入适量的裂解液，颠倒混匀，置于4℃预冷过的研磨仪中，100-150s，研磨2次；取出离心后移取上清液至容器b中，室温静置2-3min；

S2，氯仿抽提

向容器b中加入氯仿，常温水平振荡金属浴剧烈振摇45-90s，取出室温放置3-4min；离心后移取上清液至容器c中，向容器c中加入DNA酶消化工作液，常温水平振荡金属浴振摇30s，室温消化10-20min；

S3，磁珠结合RNA

取步骤(S2)中得到的上清液至容器d中，向其中加入350-450μL的绑定液和5-15μL的磁珠悬液，样本混匀后置于磁力架上，待磁珠完全吸附后用弃去液体，得吸附后磁珠；

S4，RNA第一次漂洗

向步骤(S3)所得磁珠中加入550-650μL漂洗液1，样本震荡混匀后置于磁力架上，待磁珠完全吸附后弃去所有液体，保证无液体残留；

S5，RNA第二次漂洗

向步骤(S4)所得磁珠中加入550-650μL漂洗液2，样本震荡混匀后置于磁力架上，待磁珠完全吸附后弃去所有液体，保证无液体残留；

S6，RNA洗脱

向步骤(S5)所得磁珠中加入40-60μL的洗脱液，静置后将样本震荡混匀，置于磁力架上，待磁珠吸附后，收集洗脱液即为提取所得的RNA溶液，-80℃保存。

8.根据权利要求7所述的一种高通量的总RNA提取的试剂盒进行RNA提取的方法，其特征在于，所述DNA酶消化工作液组分如下：

Recombinant DNase I，单反应用量10μL；

10X DNase I Buffer，单反应用量70μL。