[发明专利]一种用于半胱氨酸和microRNA生物标志物的检测方法及应用

权利要求书

1.一种用于半胱氨酸的检测的DNA@AuNCs的合成方法，其特征在于：包括DNA@AuNCs的合成：

a、将链长为15-30的聚核苷酸配制成10-200μM的储备液，按照3-4:1-2体积比与HAuCl₄溶液混合，搅拌混匀，得到混合溶液；

b、向混合溶液中加入100-400mM柠檬酸钠溶液，并混合均匀；然后将所得溶液在室温黑暗中放置12-36h以促进AuNCs的形成，得到DNA@AuNCs。

2.根据权利要求1所述的一种用于半胱氨酸检测的DNA@AuNCs的合成方法，其特征在于：步骤a所述聚核苷酸溶液和氯金酸溶液的体积比是3-4:1；步骤a所述搅拌为磁力搅拌；步骤a所述的氯金酸溶液的浓度是0.5-5mM。

3.根据权利要求1所述的一种用于半胱氨酸检测的DNA@AuNCs的合成方法，其特征在于：步骤b所述柠檬酸钠溶液浓度为100-200mM。

4.权利要求1所述方法得到的DNA@AuNCs体系在Cys定量检测方面的应用，其特征在于：

a.将浓度为50nM-5μM的Cys溶液加入至DNA@AuNCs荧光探针中，混合均匀；然后将混合溶液置于36-38℃水浴中孵育0.5-1.5h；最后测定所得溶液在400～750nm范围内的荧光发射光谱；

b.用荧光法检测不同浓度的Cys标准溶液所对应的荧光强度F，以系列Cys标准溶液的浓度为横坐标，相对荧光强度(F-F0)/F0为纵坐标，绘制浓度-荧光强度工作曲线，拟合线性回归方程；

c.将含有Cys的实际样品溶液加入至DNA@AuNCs荧光探针中，测定其在450nm下的荧光强度，将强度值代入至工作曲线，计算得到Cys的浓度。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：加入Cys后，DNA@AuNCs的荧光强度降低。

6.一种用于miRNA检测的DNA@AuNCs的合成方法，其特征在于：包括DNA@AuNCs的合成：

a、将包含聚核苷酸和相应miRNA互补链的DNA配制成10-200μM的储备液，按照3-4:1-2体积比与HAuCl₄溶液混合，搅拌混匀，得到混合溶液；

b、向混合溶液中加入100-400mM柠檬酸钠溶液，并混合均匀；然后将所得溶液在室温黑暗中放置12-36h以促进AuNCs的形成，得到DNA@AuNCs。

7.根据权利要求6所述的一种用于miRNA检测的DNA@AuNCs的合成方法，其特征在于：步骤a所述储备液和氯金酸溶液的体积比是3-4:1；步骤a所述搅拌为磁力搅拌；步骤a所述的氯金酸溶液浓度为0.5-5mM。

8.根据权利要求6所述的一种用于miRNA检测的DNA@AuNCs的合成方法，其特征在于：步骤b所述柠檬酸钠溶液浓度为100-200mM。

9.权利要求6所述方法得到的DNA@AuNCs体系在miRNA定量检测方面的应用，其特征在于：

a.将浓度为5nM-5μM的miRNA溶液加入至DNA@AuNCs荧光探针中，混合均匀；然后将混合溶液置于36-38℃水浴中孵育0.5-1.5h；最后测定所得溶液在400～750nm范围内的荧光发射光谱；

b.用荧光法检测不同浓度的miRNA标准溶液所对应的荧光强度F，以系列miRNA标准溶液的浓度为横坐标，相对荧光强度(F-F0)/F0为纵坐标，绘制浓度-荧光强度工作曲线，拟合线性回归方程；

c.将含有miRNA的实际样品溶液加入至DNA@AuNCs荧光探针中，测定其在450nm下的荧光强度，将强度值代入至工作曲线，计算得到miRNA的浓度。

10.根据权利要求9所述应用，其特征在于：加入miRNA后，DNA@AuNCs的荧光强度降低。