[发明专利]一种经过改良的新型无创小鼠气管滴注造模方法

说明书

本发明公开了一种经过改良的新型无创小鼠气管滴注造模方法，分别涉及博莱霉素致肺纤维化模型中小鼠悬挂固定板装置制作，气管插管针制作，临时肺活量计的制作和小鼠气管插管操作等过程，具体的，每只小鼠麻醉后悬挂固定在自制的小鼠固定板上，暴露声门并使用20G塑料导管针在小鼠气管内按10μL/10g体重定量滴注浓度为5.0mg/mL的博莱霉素溶液，SPF级饲养，博莱霉素诱导肺纤维化模型造模成功。取小鼠肺组织进行肺部形态和病理分析，结果证实此法操作简单，成本低，博莱霉素诱导肺纤维化模型成功率高，纤维化程度呈进行性发展。本发明为进一步研究博莱霉素诱导肺纤维化发病机制及药物筛选提供了稳定可靠的实验动物模型。

【技术领域】

本发明属于医学及实验技术领域，具体涉及一种经过改良的新型无创小鼠气管滴注造模方法。

【背景技术】

特发性肺纤维化(Idiopathic Pulmonary Fibrosis，IPF)是一种慢性进行性纤维化间质性肺病，其典型特征是细胞外基质(ECM)的过度产生和沉积以及异常肺组织结构的重塑，目前尚无治愈方法，诊断时平均年龄超过65岁，诊断后平均生存期为2-3年；它是特发性间质性肺炎最常见的病因，以前被认为是一种罕见疾病，但在全球范围内发病率和患病率呈上升趋势。至今，全球IPF发病率为0.2-93.7/10万/年，欧洲和美洲发病率较高，亚洲和南美发病率较低。IPF的主要临床表现为呼吸困难进行性加重、肺功能下降。尽管目前对IPF的认识有所提高，治疗也有所进步，但除了肺移植外，还没有其他治疗IPF的方法。

IPF是一种老年性疾病，如何预防治疗特发性肺纤维化一直是世界性难题。目前，已经有一些药物如吡非尼酮已经被用于治疗特发性肺纤维化，但排斥反应、并发症及高昂的治疗费用限制了其临床应用。因此，迫切需要开发新型高效抗特发性肺纤维化药物，如今研发药物主要用到小鼠肺纤维化模型。

目前认为，IPF是由持续或重复的肺上皮损伤和随后的成纤维细胞的激活和肌成纤维细胞的分化造成的。持续的肌成纤维细胞表型导致ECM的过度沉积和异常的肺部修复，导致组织疤痕的形成、肺泡结构的扭曲和肺功能的不可逆转的丧失。肺组织发生肺纤维化后导致的肺功能障碍严重影响甚至危害人类的生命健康。研究表明，博莱霉素诱导的肺纤维化与特发性肺纤维化的病情进展高度一致，因此一般使用博莱霉素诱导小鼠肺纤维化模型。

现行技术中，为构建一个理想的肺间质纤维化模型，使博莱霉素进入气管的方法主要有3种：

1、气管环直接注射，即手术剪开小鼠颈部皮肤，分离肌肉并暴露气管，注射针从气管直接将博莱霉素溶液注入后，缝合伤口而获得肺纤维化模型；

2、雾化器雾化吸入，即雾化器将博莱霉素溶液雾化后随着小鼠呼吸自行吸入；

3、传统气管滴注，即经小鼠口鼻进行气管插管，一般用小鼠气管插管套管或静脉留置针作为气管滴注工具，通过经口鼻气管插管将博莱霉素溶液滴入气管中，此方法与本申请的方法最为接近。

但现有的几种方法仍存在技术缺陷：

1、气管环注射虽然可以精准观察到气道，但对小鼠的创伤较大，小鼠不易耐受，容易发生感染死亡，不仅会造成经济损失，还会影响后续实验进行；

2、雾化器雾化吸入法难以定量博莱霉素溶液的有效吸入，导致建模病理程度不均匀，模型建立成功的可信度大大降低；而且需要使用额外的仪器和耗材，增加了实验经费和时间成本。

3、传统气管滴注法操作中很难精确观察到气道位置，很容易误插入食管导致造模失败或损伤气管咽部。

【发明内容】