[发明专利]一种经过改良的新型无创小鼠气管滴注造模方法

权利要求书

1.一种经过改良的新型无创小鼠气管滴注造模方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1.术前准备：

S1-1：通过高压灭菌器对100μL枪头、塑料平头钳、压舌板和20G塑料导管针头进行消毒；

S1-2：使用生物安全柜，制备博莱霉素溶液，确保均匀混合；

S1-3：准备一个干净的工作空间，包括1m²的工作空间；

S1-4：自制小鼠悬挂固定板，打开立定在操作者面前的工作台上；

S1-5：将一根单长度10cm的4.0号缝线在手术板的顶端螺钉上打固定结；

S1-6：将自制小鼠临时肺活量计松散地固定在20G塑料导管针头上，并放在自制小鼠悬挂固定板的一侧备用；

S1-7：抽取300μL空气到1mL注射器中，放置在自制小鼠悬挂固定板的一侧备用；

S1-8：再剪一块14cm长的医学胶带，放置在板的一侧备用，用于板上的小鼠固定；

S1-9：配置20％(w/v)乌拉坦，根据0.8mL/100g体重吸取麻醉剂腹腔注射小鼠，观察其麻醉深度；

S2.气管插管：

S2-1：在等待小鼠麻醉起效时，用移液枪装100μL枪头，按10μL/10g体重吸取浓度为5.0mg/mL的博莱霉素溶液，并放置在板的一侧备用；

S2-2：准备好后，将麻醉小鼠上门牙挂在固定手术平台螺钉的线上，确保小鼠呈仰卧位，其背部平躺在平台表面；

S2-3：将准备好的医学胶带松散地固定在小鼠胸腔的下部，不能固定太紧，以免限制呼吸；

S2-4：将手电筒打开，使其固定在距离气管位置的皮肤表面1-2cm；

S2-5：用无菌平头镊子固定舌头；小心避开下门牙，轻轻握紧舌头，将舌头从口腔中抽出；

S2-6：用剩下的一只手，插入压舌板，把舌头压平在口腔底部，松开镊子，在接下来的两步骤中保持压舌板的固定；

S2-7：将手电筒向近处引导，直到到达主干支气管的水平，确定灯光的方向，以便能看到气管的情况；

S2-8：倾斜注射器，使其顺着气管的自然路径，并将20G塑料导管尖端连同装有PBS液滴的临时肺活量计直接放入气管腔，放置成功后，PBS液滴将随着每次呼吸开始上升和下降；

S2-9：将20G导管再送入5mm，取出压舌板；

S2-10：将注射器移到另一只手，抓住针栓，轻轻地取出注射器；

S2-11：将博莱霉素溶液注入塑料导管针栓内部中心，待溶液流入后连接第二个注射器并将300μL空气快速注入塑料导管中；

S2-12：用装PBS液滴的第一个注射器替换第二个注射器，如果气管插管成功进行，液滴会继续上升和下降；

S3.术后护理：

将小鼠在手术台上静置，让博莱霉素溶液进入肺部，取出塑料导管和胶带，将小鼠放在干燥温暖的地方，密切观察小鼠呼吸状态以及听诊器监测心率，直到小鼠苏醒后收回笼中正常饲养，每天观察其状态，称量体重；

S4.取小鼠肺组织制作病理切片并染色后观察：

饲养28天后，腹腔注射20％w/v乌拉坦溶液，麻醉后直接采用颈椎脱臼法处死小鼠，开胸取出肺组织并拍照，取小鼠左肺经4％v/v多聚甲醛固定，再经过乙醇脱水，浸蜡，切片机3μm切片，二甲苯脱蜡，HE染色过程，显微镜下观察肺组织结构变化，最后进行病理结果分析。

2.根据权利要求1所述的一种经过改良的新型无创小鼠气管滴注造模方法，其特征在于：步骤S1-6所述的自制小鼠临时肺活量计，是取出1个1mL注射器中的柱塞，将柱塞丢弃，然后将60μLPBS存入注射管的顶部以形成密闭空间，从而产生一个临时的肺活量计，其用途是保障插管插入气管而非食管，滴注博莱霉素溶液后有助于判断是否操作成功。

3.根据权利要求1所述的一种经过改良的新型无创小鼠气管滴注造模方法，其特征在于：步骤S1中所述的自制小鼠悬挂固定板为木头材质，固定板与工作台产生底角60-80°等腰三角形，设有倾斜操作界面，底部支撑面和侧边横截面，上方水平设有一条4.0号线。

4.根据权利要求1所述的一种经过改良的新型无创小鼠气管滴注造模方法，其特征在于：步骤S2-3所述的将准备好的医学胶带松散地固定在小鼠胸腔的下部，要注意固定的位置和松紧度，保证小鼠的胸廓活动范围。