[发明专利]一种用于检测半胱氨酸的近红外荧光分子探针及其制备方法和试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测半胱氨酸的近红外荧光分子探针DBCM-Cys，其特征在于：结构式如下：

2.一种用于检测半胱氨酸的近红外荧光分子探针的制备方法，其特征在于：步骤如下：

(1)将DCM和HBC充分溶解于乙腈溶剂，加入哌啶，惰性气体保护下于40～60℃回流反应至结束，纯化得DBCM；

(2)在惰性气体保护、0℃下将DBCM溶于无水二氯甲烷中，滴加三乙胺，最后缓慢滴入溶有丙烯酰氯的二氯甲烷溶液，0℃下搅拌至反应完全，纯化后可得目标荧光探针DBCM-Cys。

3.如权利要求2所述的用于检测半胱氨酸的近红外荧光分子探针的制备方法，其特征在于：所述惰性气体为氮气或氩气。

4.如权利要求2所述的用于检测半胱氨酸的近红外荧光分子探针的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，回流温度为50℃。

5.如权利要求2所述的用于检测半胱氨酸的近红外荧光分子探针的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，DCM与HBC的用量比为：1:0.8～1:1.5mmol/mmol，DCM与溶剂的用量比为：1:8～1:15mmol/mL，DCM与哌啶的用量比为：12:1～7:1mmol/mmol；

步骤(2)中，DBCM与无水二氯甲烷的用量比为：1:8～1:20mmol/mL，DBCM与三乙胺的用量比为：1.5:1～2.5:1mmol/mL，丙烯酰氯的二氯甲烷溶液浓度为：1:4～1:6mmol/mL，DBCM与丙烯酰氯的用量比为：1:1～1:1.5mmol/mmol。

6.如权利要求2所述的用于检测半胱氨酸的近红外荧光分子探针的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，DCM与HBC的用量比为：1:1mmol/mmol，DCM与溶剂的用量比为：1:10mmol/mL，DCM与哌啶的用量比为：10:1mmol/mmol；

步骤(2)中，DBCM与无水二氯甲烷的用量比为：1:10mmol/mL，DBCM与三乙胺的用量比为：2:1mmol/mL，丙烯酰氯的二氯甲烷溶液浓度为：1:5mmol/mL，DBCM与丙烯酰氯的用量比为：1:1mmol/mmol。

7.如权利要求2所述的用于检测半胱氨酸的近红外荧光分子探针的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，纯化方式为减压除去溶剂，柱层析纯化；步骤(2)中，纯化方式为萃取、合并有机层，干燥后浓缩，柱层析纯化。

8.一种用于检测半胱氨酸的试剂盒，包含试剂储备液a和试剂储备液b，其特征在于：试剂储备液a是乙腈-PBS缓冲溶液，试剂储备液b为DBCM-Cys荧光分子探针的有机溶剂溶液，所述有机溶剂选自二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、乙腈中的其中一种。

9.如权利要求8所述的用于检测半胱氨酸的试剂盒，其特征在于：试剂储备液a中乙腈和PBS缓冲溶液的体积比为3:7，pH＝7.4；所述试剂储备液b中荧光分子探针的浓度为1mM。

10.如权利要求8所述的用于检测半胱氨酸的试剂盒，其特征在于：试剂盒中的试剂储备液a和所述试剂储备液b的体积比为99/1。