[发明专利]一种丝状真菌通用CRISPR/Cas9编辑系统及其构建方法在审
| 申请号： | 202310403822.3 | 申请日： | 2023-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN116555316A | 公开（公告）日： | 2023-08-08 |
| 发明（设计）人： | 黄和;施天穹;郭琪;张驰;徐晴 | 申请（专利权）人： | 南京师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12N15/66;C12R1/685;C12R1/68;C12R1/645 |
| 代理公司： | 西安杜诺匠心专利代理事务所(普通合伙) 61272 | 代理人： | 苏雪雪 |
| 地址： | 210046 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 丝状 真菌 通用 crispr cas9 编辑 系统 及其 构建 方法 | ||
1.一种丝状真菌通用CRISPR/Cas9编辑系统的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
获取丝状真菌H2B定位信号和5sRNA启动子的核苷酸序列；
将丝状真菌H2B作为模板设计引物FFH2B-F和FFH2B-R，并PCR扩增出带有同源臂的FFH2B表达框之后，利用内切酶SpeI将模板质粒pUC-Cas9-HPH酶切成线性片段，并将线性片段与所述带有同源臂的FFH2B表达框进行克隆和测序验证，获得重组质粒pUC-Cas9-HPH-FFH2B，其中，所述模板质粒pUC-Cas9-HPH的核苷酸序列为SEQ ID NO.5所示；
将丝状真菌N20表达框作为模板设计引物FFN20-F和FFN20-R，并扩增出带有同源臂的FFN20表达框之后，利用内切酶KpnI将模板质粒pUCneo酶切成线性片段，并将线性片段与所述带有同源臂的FFN20表达框进行克隆和测序验证，获得重组质粒pUCneo-FfN20；
将所述重组质粒pUC-Cas9-HPH-FFH2B与所述重组质粒pUCneo-FFN20同时转化到丝状真菌感受态细胞中，即可根据靶标基因进行编辑。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，根据NCBI获取所述丝状真菌H2B定位信号和所述5sRNA启动子的核苷酸序列。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述丝状真菌包括藤仓赤霉菌、烟曲霉、黑曲霉。
4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述丝状真菌选为藤仓赤霉菌时，相匹配的引物FfH2B-F的核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示；相匹配的引物FfH2B-R的核苷酸序列为SEQ ID NO.4所示。
5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，相匹配的引物FfN20-F的核苷酸序列为SEQ ID NO.7所示；相匹配的引物FfN20-R的核苷酸序列为SEQ IDNO.8所示。
6.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述丝状真菌选为黑曲霉时，相匹配的引物AnH2B-F的核苷酸序列为SEQ ID NO.13所示；所述引物AnH2B-R的核苷酸序列为SEQID NO.14所示。
7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，相匹配的引物AnN20-F的核苷酸序列为SEQ ID NO.16所示；相匹配的引物AnN20-R的核苷酸序列为SEQ ID NO.17所示。
8.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述丝状真菌选为烟曲霉时，相匹配的引物AfH2B-F的核苷酸序列为SEQ ID NO.21所示；相匹配的引物AfH2B-R的核苷酸序列为SEQ ID NO.22所示。
9.根据权利要求8所述的构建方法，其特征在于，相匹配的引物AfN20-F的核苷酸序列为SEQ ID NO.24所示；相匹配的引物AfN20-R的核苷酸序列为SEQ ID NO.25所示。
10.一种根据权利要求1-9所述方法构建的丝状真菌通用CRISPR/Cas9编辑系统。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于南京师范大学，未经南京师范大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202310403822.3/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
