[发明专利]松乳菇菌根促生菌及其制备方法和其应用

权利要求书

1.一种松乳菇菌根促生菌，所述松乳菇菌根促生菌为蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus(GDMCC No.63270)、高山芽孢杆菌Bacillus altitudinis(GDMCC No.63269)、辣椒芽孢杆菌Bacillus zanthoxyli(GDMCC No.63271)中的任一种或组合。

2.如权利要求1所述的松乳菇菌根促生菌用于促进松乳菇菌丝生长的应用。

3.如权利要求2所述的应用，具体包括如下步骤：

(1)取保存于4℃的促生菌划线接种于LB固体培养基，32-35℃培养24-48h，得活化的促生菌，按接种量为1-5％(w/v)接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，30-35℃、160-200r/min振荡培养48-60h后，得促生菌菌液；

(2)将步骤(1)制得的促生菌菌液用0.22μm细菌过滤器过滤，

收集上清滤液，得促生物添加液，将促生物添加液按体积比1:15-20加入到PDA培养基中混合，制得促生培养基；

(3)取边长4-5mm大小的松乳菇菌丝块，接种于20-25ml步骤(2)制得的促生培养基中，20-25℃恒温培养40-55天，即得。

4.如权利要求3所述的应用，步骤(2)中，当促生菌为两种菌时，将各自的上清滤液按混合比例1-2:1-2混合得到促生物添加液，优选混合比例为1-1.5:1-1.5，更优选混合比例为1:1。

5.如权利要求3所述的应用，步骤(2)中，当促生菌为三种菌时，将各自的上清滤液按混合比例1-2:1-2：1-2混合得到促生物添加液，优选混合比例为1-1.5:1-1.5:1-1.5，更优选混合比例为1:1:1。

6.如权利要求1所述的松乳菇菌根促生菌用于促进松乳菇菌根合成的应用。

7.如权利要求6所述的应用，具体包括如下步骤：

(1)选取侧根发达的松属植株幼苗，每株松属植株幼苗根部表面放置2份边长为10-15×5-10mm的松乳菇菌丝块，同时添加1-5m l促生菌菌液；

(2)将步骤(1)处理后的松属植株幼苗置于根菌育苗盒中，用培养基质覆盖根部，于18-20℃，光照10000-20000lx，相对湿度90-95％下培养14-30d，即得，优选地，所述培养基质由泥炭土：蛭石按照体积比为0.5-2：1均匀混合而成。

8.如权利要求7所述的应用，所述松属植株幼苗的培养方法为，将松属植株种子清水浸泡36-48h后，再将种子浸泡在浓度为30％的双氧水中处理30-60min，过滤，种子用无菌水冲洗后，将其均匀置于培养筐中，种子表面覆盖1-3cm厚的种子萌发基质，定期浇水，设定昼长14-16h和夜长8-10h、16-20℃条件下培养50-60天，即得松属植物幼苗，所述种子培养基质由珍珠岩︰蛭石按照体积比1-3︰1均匀混合而成。

9.如权利要求6-8任一项所述的应用，松乳菇菌根合成率大于95％，优选大于99％，更优选为100％。

10.如权利要求6-9任一项所述的应用，所述松乳菇菌丝块的制备方法包括如下步骤：

(1)取保存于4℃的促生菌划线接种于LB固体培养基，35℃培养24-48h，得活化的促生菌，按接种量为1-5％(w/v)接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，30-35℃、160-200r/min振荡培养48-60h后，得促生菌菌液；

(2)将步骤(1)制得的促生菌液用0.22μm细菌过滤器过滤，收集上清滤液，得促生物添加液，将促生物添加液按体积比1:15-20加入到PDA培养基中混合，制得促生培养基；

(3)取边长4-5mm大小的松乳菇菌丝块，接种于20-25m l的步骤(2)制得的促生培养基中，20-25℃恒温培养40-55天，即得；优选地，步骤(2)中，当促生菌为两种菌时，将各自的上清滤液按混合比例1-2:1-2混合得到促生物添加液，优选混合比例为1-1.5:1-1.5，更优选混合比例为1:1。

优选地，步骤(2)中，当促生菌为三种菌时，将各自的上清滤液按混合比例1-2:1-2：1-2混合得到促生物添加液，优选混合比例为1-1.5:1-1.5:1-1.5，更优选混合比例为1:1:1。