[发明专利]一种基于miR-302d骨架的高效率shRNA表达载体及其制备和应用

权利要求书

1.一种RNAi骨架载体，其特征在于，所述RNAi骨架载体包含miR-302d骨架序列；优选地，所述miR-302d骨架序列如SEQ ID NO.2所示；优选地，所述RNAi骨架载体序列如SEQ IDNO.1所示。

2.根据权利要求1所述的RNAi骨架载体，其特征在于，所述RNAi骨架载体包括5’端序列，所述5’端序列的长度为80～23nt；优选地，所述RNAi骨架载体包括3’端序列，所述3’端序列的长度为133～29nt。

3.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体包含权利要求1～2任一项所述的RNAi骨架载体；优选地，所述载体还包括shRNA。

4.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体包含茎环结构区域，所述茎环结构区域序列完全互补；优选地，所述重组载体的茎环结构区域中靶向shRNA的序列片段的长度为21～23nt；优选地，所述重组载体的茎环结构区域中添加一对不匹配的尿嘧啶。

5.根据权利要求3～4任一项所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体包括以下至少一种：

(a1)5’端序列如SEQ ID NO.5所示；

(a2)3’端序列如SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.7所示；

(a3)茎环结构区域序列如SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14所示。

6.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞中含有权利要求1～2任一项所述的RNAi骨架载体或权利要求3～5任一项所述的重组载体。

7.一种RNAi骨架载体的构建方法，包括将miR-302d序列插入载体制备而成。

8.权利要求1～2任一项所述RNAi骨架载体或权利要求3～5任一项所述的重组载体或权利要求6所述的重组细胞在以下至少一项中的应用：

(I)敲除或沉默靶基因；

(II)基因功能研究；

(III)基因治疗；

(IV)药物筛选和/或制备；

(V)细胞信号转导通路研究；

(VI)抗病毒、抗肿瘤研究。

9.一种产生siRNA或实施RNAi的方法，包括将权利要求1～2任一项所述的RNAi骨架载体或权利要求3～5所述的重组载体转入细胞中。

10.一种产品，所述产品包含权利要求1～2任一项所述的RNAi骨架载体或权利要求3～5任一项所述的重组载体或权利要求6所述的重组细胞，优选地，所述产品还包括将权利要求1～2任一项所述的RNAi骨架载体或权利要求3～5任一项所述的重组载体导入细胞的其它试剂。