[发明专利]一种促进目标蛋白在大肠杆菌细胞外分泌表达的表达载体在审
| 申请号： | 202310396886.5 | 申请日： | 2023-04-14 |
| 公开（公告）号： | CN116555308A | 公开（公告）日： | 2023-08-08 |
| 发明（设计）人： | 王声斌;林梓煌;牛放;王志鹏;赵芙蓉;彭阳选 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;C07K19/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 成都方圆聿联专利代理事务所(普通合伙) 51241 | 代理人： | 张淑枝 |
| 地址： | 510640 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 促进 目标 蛋白 大肠杆菌 细胞 外分泌 表达 载体 | ||
1.一种促进目标蛋白在大肠杆菌细胞外分泌表达的表达载体，其特征在于，至少包含：
(1)目标蛋白编码序列和YebF蛋白编码序列，目标蛋白编码序列与YebF蛋白编码序列通过TEV酶切识别位点编码序列连接；
(2)DsbA和DsbC蛋白编码基因。
2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，还包含SecM蛋白编码基因。
3.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体不含lacI基因。
4.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述YebF蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示，TEV酶切识别位点的氨基酸序列为ENLYFQ，DsbA蛋白氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，DsbC蛋白氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。
5.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述DsbA和DsbC蛋白编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。
6.根据权利要求2所述的表达载体，其特征在于，所述SecM蛋白氨基酸序列如SEQ IDNo.4所示。
7.一种含有权利要求1-6任一项所述的表达载体的大肠杆菌。
8.一种促进目标蛋白在大肠杆菌细胞外分泌表达的方法，其特征在于，将目标蛋白与YebF蛋白在大肠杆菌中融合表达，同时共表达DsbA蛋白、DsbC蛋白。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，还同时共表达SecM蛋白。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，目标蛋白与YebF融合蛋白、DsbA蛋白、DsbC蛋白及SecM蛋白通过同一表达质粒表达，所述表达质粒空载体为pET28b，且去除了lacI基因。
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