[发明专利]Trop2特异性诊疗一体化分子影像探针的制备方法及应用

说明书

本发明提供了一种Trop2特异性诊疗一体化分子影像探针的制备方法及应用，本发明基于Trop2特异性纳米抗体WWD98和WWD328构建的Trop2特异分子影像探针，可用于免疫PET显像；通过其开展免疫PET显像可无创地显示肿瘤内Trop2表达，实现了对人Trop2分子表达的无创可视化，为Trop2阳性的实体瘤的诊断和监测提供了更好的方法，可进一步实现胰腺癌和胃癌等多种肿瘤的无创诊断。且本发明的探针具有制备工艺简单、成本低廉、特异性高、稳定性高、显像周期短、辐射剂量低，并且易于临床转化等优点。

技术领域

本发明涉及分子影像探针技术领域，具体涉及一种Trop2特异性诊疗一体化分子影像探针的制备方法及应用。

背景技术

1993年比利时科学家Hamers等人在《Nature》杂志中首次报道在羊驼外周血液中存在一种天然缺失轻链的抗体(Nature.1993；363(6428):446-8.)，这种具有特殊结构域的抗体即为重链抗体(Heavy-chain antibodies,HCAbs)。通过分子生物学手段，克隆重链抗体的可变区即可得到只有重链可变区的抗原结合片段，即为纳米抗体(VHH，VariableDomain of Heavy Chain of Heavy Chain Antibody)。VHH晶体宽为2.5nm，长4nm，分子量只有15kDa，因此也被称为纳米抗体(Ablynx公司注册商品名)。纳米抗体是目前已知的可结合目标抗原的最小抗体单位，具有亲和力高、分子量小、制备成本低廉(既可以运用大肠杆菌表达，也可以运用酵母、中国仓鼠卵巢细胞等真核表达体系表达)、易于临床转化和推广应用的优点。

纳米抗体是近年来构筑分子影像探针的热门靶向载体(Theranostics.2014；4(4):386-98.；)J Nucl Med.2022Oct；63(10):1705-1709.)。目前，多种短半衰期核素已用于标记纳米抗体，制备纳米抗体分子影像探针。锝-99m(^99mTc；T_1/2＝6.02h)标记靶向程序性死亡配体1(PD-L1)的纳米抗体探针已成功转化至临床，用于非小细胞肺癌患者的无创诊断(J Nucl Med.2019；60(9):1213-1220.)；镓-68(⁶⁸Ga；T_1/2＝1.1h)标记靶向人类表皮生长因子受体(HER2)的纳米抗体探针也已成功转化至临床，用于乳腺癌的无创诊断(J NuclMed.2016；57(1):27-33.)。以上实例说明放射性核素标记纳米抗体探针极具临床转化应用前景，可用于人类恶性肿瘤的早期无创诊断、关键致病靶点的可视化、单克隆抗体(mAb)治疗患者的筛选以及单克隆抗体治疗后疗效评价。

滋养层细胞表面抗原2(Trop2)是一种细胞膜表面糖蛋白，由一个36kDa的新生多肽经N-连接糖基化翻译修饰形成。它通过多种信号传导途径调节肿瘤的增殖、侵袭和迁移，并在干细胞生物学中发挥作用。在一项包含197个石蜡包埋的胰腺癌原发肿瘤组织的回顾性研究中，分析了Trop2抗原的表达，免疫组化结果发现55％的抗原呈过度表达，这与淋巴结转移、肿瘤分化不良和预后不良明显相关(P0.05)。Trop2的表达也与胃癌、女性生殖系统肿瘤、前列腺癌和结直肠癌等恶性肿瘤的生物学侵袭性和预后不良有关，表明其促进肿瘤的发生发展。Trop2在正常组织和肿瘤中的表达差异使其成为极具潜力的肿瘤特异性标志物，并且能避免潜在的副作用。目前已经有以Trop2为靶点抗体药物偶联物药物进入临床试验。因此，目前迫切需要开发一种靶向Trop2的诊断工具，以实现对实体瘤中Trop2表达的无创可视化和监测。在研究伴随诊断工具的基础上，还可以进一步开发出针对Trop2的新型治疗方法。