[发明专利]一种rhTNK-tPA的分离纯化方法

权利要求书

1.一种rhTNK-tPA的分离纯化方法，其特征在于，包括将rhTNK-tPA细胞收获液从亲和层析柱上洗脱，所述亲和层析包括Lysine HyperD亲和层析；

所述Lysine HyperD亲和层析的洗脱液的pH为4.0～5.0。

2.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述Lysine HyperD亲和层析的洗脱液的组分为醋酸盐缓冲液、氨基己酸和尿素中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的分离纯化方法，其特征在于，所述洗脱液中醋酸盐缓冲液的浓度为10～20mM，氨基己酸的浓度为0.1～0.3M，尿素的浓度为2～3M。

4.根据权利要求3所述的分离纯化方法，其特征在于，所述Lysine HyperD亲和层析在洗脱步骤前进行稀释、平衡、洗杂和再平衡；

优选地，所述稀释包括将含rhTNK-tPA的收集液用F脲稀释7-9倍，所述F脲的组分为0.4M尿素、20～100mM磷酸盐缓冲液；

优选地，所述Lysine HyperD亲和层析的平衡液的组分为20～100mM磷酸盐缓冲液，pH值为7.0～9.0，用量为柱体积的1.5～3.0倍；

优选地，所述Lysine HyperD亲和层析的洗杂液的组分为20～100mM磷酸盐缓冲液和1～2M氯化钠，pH值为7.0～9.0，用量为柱体积的1.5～3.0倍；

优选地，所述Lysine HyperD亲和层析再平衡的平衡液的组分为20～100mM磷酸盐缓冲液，pH值为7.0～9.0，用量为柱体积的1.5～3.0倍。

5.根据权利要求4所述的分离纯化方法，其特征在于，所述亲和层析还包括BlueSepharose 6Fast Flow亲和层析，所述Blue Sepharose 6Fast Flow亲和层析包括将rhTNK-tPA细胞收获液依次进行平衡、洗杂和洗脱；

优选地，所述Blue Sepharose 6Fast Flow亲和层析的平衡液为20～100mM磷酸盐缓冲液，pH值为7.0～9.0，用量为柱体积的1.5～3.0倍；

优选地，所述Blue Sepharose 6Fast Flow亲和层析的洗杂液的组分为20～100mM磷酸盐缓冲液和1～2M氯化钠，pH值为7.0～9.0，用量为柱体积的1.5～3.0倍；

优选地，所述Blue Sepharose 6Fast Flow亲和层析的洗脱液的组分为20～100mM磷酸盐缓冲液、1～2M氯化钠和2～5M尿素，pH值为7.0～9.0，用量为柱体积的1.5～3.0倍。

6.根据权利要求5所述的分离纯化方法，其特征在于，所述分离纯化方法还包括在亲和层析后进行离子交换层析，所述离子交换层析包括Capto S ImpAct离子交换层析。

7.根据权利要求6所述的分离纯化方法，其特征在于，所述Capto SImpAct离子交换层析包括平衡和洗脱；

优选地，所述Capto S ImpAct离子交换层析的平衡液为50～60g/L精氨酸，pH值为4.5～5.5，用量为柱体积的1.5～3.0倍；

优选地，所述Capto S ImpAct离子交换层析的洗脱液的组分为50～60g/L精氨酸，pH值为7.0～7.5，用量为柱体积的1.5～3.0倍。

8.根据权利要求7所述的分离纯化方法，其特征在于，所述分离纯化方法包括将rhTNK-tPA细胞收获液依次进行Blue Sepharose 6Fast Flow亲和层析、Lysine HyperD亲和层析和Capto S ImpAct离子交换层析。

9.根据权利要求8所述的分离纯化方法，其特征在于，在进行所述Capto S ImpAct离子交换层析前，还包括低pH处理步骤；

所述低pH处理步骤包括将经过Lysine HyperD亲和层析层析后得到的收集液在低pH状态下放置。

10.根据权利要求9所述的分离纯化方法，其特征在于，所述低pH为4-5，放置时间为60-75min。