[发明专利]一种用于评价生物提取酶制品工段产物的方法及应用

说明书

本发明公开了一种用于评价生物提取酶制品工段产物的方法及应用。该方法包括以下步骤：(1)取生物提取酶制品工艺中的某一工段的产物，作为待评估样；(2)将所述待评估样进行稀释、透析和冷冻干燥，再配制为待测溶液，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测，获得待测目标蛋白的含量；(3)将待评估样配制为待测溶液，经BCA法进行检测，获得总蛋白质量；(4)将待测目标蛋白的含量乘以总蛋白质量，获得待测目标蛋白的质量；(5)至少重复1次步骤(1)～(4)；步骤(2)和步骤(3)的先后顺序不限。本发明的方法可对生物提取酶制品工艺中的不同工段或同一工段中不同批次的产物中待测目标蛋白的损失大小进行评估，有效监测工艺过程。

技术领域

本发明涉及一种用于评价生物提取酶制品工段产物的方法及应用。

背景技术

生物提取是酶制品工业化生产中重要的技术方法，具有产量大、成本低等优势。在化学制药中，酶制品原料药如胰蛋白酶、糜蛋白酶、玻璃酸酶和凝血酶等的生产，都广泛采用生物提取法。该方法的起始原料往往是生物组织、酶原等，其纯度、质量会影响酶制品的产品收率、质量等工艺指标。同时各工段产物组份较为复杂，所以通常采用的性状判断等方法，不能有效的进行定性定量分析。这使得整个提取工艺处于不稳定、不可控的状态，影响生产工艺稳定性，也掣肘了工艺优化、改进的进行。

因此，如何通过一种易于操作、成本低廉的检测方法来评估工段样品中待测目标蛋白的含量，加强对于生物提取酶制品工段产物的监控，是当前亟待解决的问题。

发明内容

本发明要解决的技术问题是为了克服现有技术中酶制品工段产物成分较为复杂，提取工艺不可控，目前无法有效监控工艺过程并控制酶制品质量的缺陷，提供一种用于评价生物提取酶制品工段产物的方法及应用。本发明的测试方法将凝胶电泳和BCA测试法联合对酶制品工段产物进行检测，可以分别定性、定量的获取工段产物检测数据，对生物提取酶制品工艺中的不同工段的产物中的待测目标蛋白的损失大小或同一工段中不同批次的产物中待测目标蛋白的损失大小进行评估，从而有效监测工艺过程。

本发明是通过下述技术方案来解决上述技术问题：

本发明提供了一种用于评价生物提取酶制品工段产物的方法，该方法包括以下步骤：

(1)取生物提取酶制品工艺中的某一工段的产物，作为待评估样；

(2)将所述待评估样进行稀释、透析和冷冻干燥，再配制为待测溶液，后根据待测目标蛋白的种类进行聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测，获得所述工段样品中待测目标蛋白的含量；

(3)将所述待评估样配制为待测溶液，经BCA法进行检测，获得所述工段样品中总蛋白质量；

(4)将所述待测目标蛋白的含量乘以所述总蛋白质量，获得某一工段的产物中待测目标蛋白的质量；

(5)至少重复1次步骤(1)～(4)，以得到生物提取酶制品工艺中的不同工段的产物中的待测目标蛋白的质量，从而对比得出不同工段的产物中待测目标蛋白的损失大小；

或者，得到同一工段中不同批次的产物中的待测目标蛋白的质量，从而对比得出同一工段中不同批次的产物中待测目标蛋白的损失大小；

步骤(2)和步骤(3)的先后顺序不限。

本发明中，所述酶制品较佳地为胰蛋白酶、糜蛋白酶、凝血酶、玻璃酸酶和促皮质素中的一种或多种，更佳地为胰蛋白酶或糜蛋白酶。本发明中，所述待评估样可为工段产品、工段废液或工段废固。

本发明中，当所述待评估样为工段产品时，所述工段产品的形态可为固体、潮固体、液体或混悬液。

本发明中，当所述待评估样为固体时，取样的质量一般为0.1～1.0g，例如0.5g。

所述固体一般指含水量低于20％的固体，所述％为水的质量占所述潮固体总质量的百分比。