[发明专利]一种用于评价生物提取酶制品工段产物的方法及应用

权利要求书

1.一种用于评价生物提取酶制品工段产物的方法，其特征在于，其包括以下步骤：

(1)取生物提取酶制品工艺中的某一工段的产物，作为待评估样；

(2)将所述待评估样进行稀释、透析和冷冻干燥，再配制为待测溶液，后根据待测目标蛋白的种类进行聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测，获得所述工段样品中待测目标蛋白的含量；

(3)将所述待评估样配制为待测溶液，经BCA法进行检测，获得所述工段样品中总蛋白质量；

(4)将所述待测目标蛋白的含量乘以所述总蛋白质量，获得某一工段的产物中待测目标蛋白的质量；

(5)至少重复1次步骤(1)～(4)，以得到生物提取酶制品工艺中的不同工段的产物中的待测目标蛋白的质量，从而对比得出不同工段的产物中待测目标蛋白的损失大小；

或者，得到同一工段中不同批次的产物中的待测目标蛋白的质量，从而对比得出同一工段中不同批次的产物中待测目标蛋白的损失大小；

步骤(2)和步骤(3)的先后顺序不限。

2.如权利要求1所述的用于评价生物提取酶制品工段产物的方法，其特征在于，所述酶制品为胰蛋白酶、糜蛋白酶、凝血酶、玻璃酸酶和促皮质素中的一种或多种，较佳地为胰蛋白酶或糜蛋白酶；

和/或，所述待评估样为工段产品、工段废液或工段废固；

其中，当所述待评估样为工段产品时，所述工段产品的形态较佳地为固体、潮固体、液体或混悬液。

3.如权利要求1所述的用于评价生物提取酶制品工段产物的方法，其特征在于，所述稀释的过程中，采用的溶剂为水；

和/或，所述稀释的过程中，当所述待评估样为潮固体时，所述待评估样的质量与所述稀释后溶液的总体积之比为0.03～0.07g/mL，例如0.05g/mL；当所述待评估样为液体时，所述待评估样的体积与所述稀释后溶液的总体积之比为0.1～0.3，例如0.2。

4.如权利要求1所述的用于评价生物提取酶制品工段产物的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述透析满足以下条件中的一种或多种：

(a)所述透析的时间为24～48h，例如24h；

(b)所述透析的透析液为水，较佳地为纯化水；

(c)在所述透析的过程中，透析液的状态为流动状态或静置非流动状态；

较佳地，当所述透析液的状态为流动状态时，所述透析液的流速为300～500mL/h，例如400mL/h；

较佳地，当所述透析液的状态为静置非流动状态时，所述透析液的置换次数为3～5次，所述透析液为每10～14h置换一次。

5.如权利要求1所述的用于评价生物提取酶制品工段产物的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述冷冻干燥的时间为12～24h，例如18h；

和/或，步骤(2)中，所述冷冻干燥的温度为-50～-10℃，例如-20℃、-30℃或-37℃。

6.如权利要求1所述的用于评价生物提取酶制品工段产物的方法，其特征在于，步骤(2)和步骤(3)中，所述待测溶液的配制过程中，使用的溶剂为磷酸缓冲液；

其中，所述磷酸缓冲液的浓度较佳地为0.08～0.12mol/L，例如0.1mol/L；

其中，所述磷酸缓冲溶液的pH值较佳地为6.9～7.1，例如7.0。

7.如权利要求1所述的用于评价生物提取酶制品工段产物的方法，其特征在于，进行所述聚丙烯凝胶电泳法检测时，所述待测溶液的浓度为0.5-10mg/mL，例如1mg/mL、2mg/mL、5mg/mL或8mg/mL；

和/或，所述聚丙烯凝胶电泳法为非还原性聚丙烯凝胶电泳法。