[发明专利]一种免疫原、基于特异性蛋白检测克罗诺杆菌的方法及应用

说明书

本发明公开一种免疫原、基于特异性蛋白检测克罗诺杆菌的方法及应用，所述免疫原的氨基酸序列为SEQ ID NO.1。本发明基于筛选、验证获得可以代表克罗诺杆菌属内特异性的蛋白，通过原核系统进行特异性蛋白的重组表达并作为免疫原基于杂交瘤技术制备得到克罗诺杆菌单克隆抗体。利用制备的单克隆抗体，建立克罗诺杆菌胶体金快速检测方法。本发明的检测方法解决了目前克罗诺杆菌的检测方法中存在的检测成本高、检测环境受限、操作复杂的问题；本发明的试纸条可以快速简便地检测克罗诺杆菌并应用于实际样品中，对克罗诺杆菌的快速检测具有重要意义。

技术领域

本发明属于细菌检测技术领域，尤其是一种免疫原、基于特异性蛋白检测克罗诺杆菌的方法及应用。

背景技术

克罗诺杆菌属(Cronobacter)是革兰氏阴性兼性厌氧的食源性致病菌，可以在人和动物的肠道中繁殖，因污染重组婴儿奶粉导致婴儿脑膜炎、败血症、小肠结肠炎等受到广泛关注，克罗诺杆菌亦可导致老年人及免疫功能低下的成年人感染菌血症、骨髓炎等疾病。克罗诺杆菌属内的阪崎克罗诺杆菌(C.sakazakii)和丙二酸盐克罗诺杆菌(C.malonaticus)致病性很高，属内其他菌几乎没有临床意义。GB 4789.40-2016食品安全国家标准《食品微生物学检验克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验》中规定婴幼儿配方食品、乳和乳制品及其原料中不得检出。

传统的理化方法，步骤繁琐、检错易漏、不灵敏，无法达到准确的定量结果，不能满足快速检测的要求。基于分子生物学原理如PCR、多重PCR、荧光定量PCR、环介导等温扩增等多种手段，虽克服了传统培养方法的灵敏度及时长限制，有效解决了细菌漏检问题，但普遍存在检测环境受限、检测成本较高的问题。

胶体金层析法因其简单快捷的优点，现已制成多种检测试剂盒，广泛应用于检测细菌病毒等。基于免疫学原理将抗体标记于胶体金上，并将与配对抗体固定至基质，利用抗原抗体结合致胶体金产生的颜色反应判定结果。

通过检索，尚未发现与本发明专利申请相关的专利公开文献。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术中的不足之处，提供一种免疫原、基于特异性蛋白检测克罗诺杆菌的方法及应用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种用于制备可特异性结合克罗诺杆菌的单克隆抗体的免疫原，所述免疫原的氨基酸序列为SEQ ID NO.1。

如上所述的免疫原的制备方法，制备步骤如下：

基于克罗诺杆菌属内特异性基因长链脂肪酸外膜转运蛋白和外膜蛋白X蛋白中特异性片段进行筛选组合，获得的最终的序列即为克罗诺杆菌的特异性基因序列；构建载体并通过原核系统进行目的蛋白的重组表达，利用亲和层析的方式进行目的蛋白的纯化，即得；

其中，所述长链脂肪酸外膜转运蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.2，外膜蛋白X蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.3。

利用如上所述的免疫原制备得到的单克隆抗体。

如上所述的单克隆抗体在制备检测或辅助检测克罗诺杆菌的检测产品中的应用。

包含如上所述的单克隆抗体的试纸条。

如上所述的试纸条在不以疾病的诊断或治疗为目的的克罗诺杆菌检测中的应用。

一种利用如上所述的免疫原的基于特异性蛋白检测克罗诺杆菌的方法，所述方法不以疾病的诊断或治疗为目的，利用可特异性结合克罗诺杆菌的单克隆抗体检测，所述单克隆抗体是以克罗诺杆菌属内长链脂肪酸外膜转运蛋白和外膜蛋白X蛋白中特异性片段进行筛选组合构建的重组载体所表达的目的蛋白为免疫原。