[发明专利]一种免疫原、基于特异性蛋白检测克罗诺杆菌的方法及应用

权利要求书

1.一种用于制备可特异性结合克罗诺杆菌的单克隆抗体的免疫原，其特征在于：所述免疫原的氨基酸序列为SEQ ID NO.1。

2.如权利要求1所述的免疫原的制备方法，其特征在于：制备步骤如下：

基于克罗诺杆菌属内特异性基因长链脂肪酸外膜转运蛋白和外膜蛋白X蛋白中特异性片段进行筛选组合，获得的最终的序列即为克罗诺杆菌的特异性基因序列；构建载体并通过原核系统进行目的蛋白的重组表达，利用亲和层析的方式进行目的蛋白的纯化，即得；

其中，所述长链脂肪酸外膜转运蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.2，外膜蛋白X蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.3。

3.利用如权利要求1所述的免疫原制备得到的单克隆抗体。

4.如权利要求3所述的单克隆抗体在制备检测或辅助检测克罗诺杆菌的检测产品中的应用。

5.包含如权利要求3所述的单克隆抗体的试纸条。

6.如权利要求5所述的试纸条在不以疾病的诊断或治疗为目的的克罗诺杆菌检测中的应用。

7.一种利用如权利要求1所述的免疫原的基于特异性蛋白检测克罗诺杆菌的方法，其特征在于：所述方法不以疾病的诊断或治疗为目的，利用可特异性结合克罗诺杆菌的单克隆抗体检测，所述单克隆抗体是以克罗诺杆菌属内长链脂肪酸外膜转运蛋白和外膜蛋白X蛋白中特异性片段进行组合构建的重组载体所表达的目的蛋白为免疫原。

8.根据权利要求7所述的基于特异性蛋白检测克罗诺杆菌的方法，其特征在于：所述方法是基于双抗夹心法原理并结合胶体金技术，采用试纸条对克罗诺杆菌进行检测，试纸条中包含的控制线上包被有羊抗鼠二抗；制备所得单克隆抗体的配对抗体组合分别作为金标垫上金标捕获抗体与检测线上包被的检测抗体。

9.根据权利要求7所述的基于特异性蛋白检测克罗诺杆菌的方法，其特征在于：所需胶体金溶液采用柠檬酸三钠还原法制备得到；

或者，试纸条由样品垫、硝酸纤维素膜条和吸水垫组成；

或者，将待测菌液滴加至试纸条上，根据试纸条显色情况对克罗诺杆菌进行检测；

或者，选择检测抗体浓度为1.0mg/mL，稀释8倍的羊抗鼠二抗。

10.一种利用如权利要求1所述的免疫原的用于检测克罗诺杆菌的试纸条，其特征在于：

所述试纸条的制备步骤如下：

步骤一、基于克罗诺杆菌属内特异性基因长链脂肪酸外膜转运蛋白和外膜蛋白X蛋白中特异性片段进行筛选组合获得的最终的序列构建了重组载体，所表达的目的蛋白为免疫原，利用杂交瘤原理制备鼠单克隆抗体，所述长链脂肪酸外膜转运蛋白的氨基酸序列为SEQID NO.2，外膜蛋白X蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.3；

步骤二、单克隆抗体标记于胶体金溶液上，得到胶体金探针；

步骤三、进行胶体金试纸条的组装，即制备得到用于检测克罗诺杆菌的试纸条。