[发明专利]一种T细胞衔接器及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种T细胞衔接器，其特征在，包括如下结构所示融合蛋白中的一种或多种：scFv-HD、HD-scFv、scFv-HD-scFv、HD-scFv-HD、HD-HD-scFv或scFv-HD-HD；其中，scFv为单链抗体，HD为异源二聚体蛋白。

2.如权利要求1所述的T细胞衔接器，其特征在于：所述scFv与所述HD之间利用柔性氨基酸连接子GGGGS进行连接。

3.如权利要求1所述的T细胞衔接器，其特征在于：所述scFv包括靶向CD19、EpCAM、PD-L1、CD3或CD28的单链抗体。

4.如权利要求1-3任意一项所述T细胞衔接器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)通过基因合成得到scFv及HD序列，将scFv与HD连接形成不同结构的HD-scFv系列融合蛋白；

(2)在融合蛋白N端加入信号肽结构，C端加入His标签，构建HD-scFv系列质粒；

(3)将HD-scFv系列质粒单独或组合后转染至宿主细胞，连续培养后纯化，获得所述T细胞衔接器。

5.如权利要求4所述T细胞衔接器的制备方法，其特征在于：HD-scFv系列质粒进行组合时，将每组的HD元件互相配对。

6.如权利要求5所述T细胞衔接器的制备方法，其特征在于，HD-scFv系列质粒的组合方式包括：ScFv-HD(A)+HD(A’)-scFv、ScFv-HD(B)+HD(A’)-scFv+HD(B’)-HD(A)-scFv、ScFv-HD(A)+scFv-HD(B)+HD(A’)-scFv-HD(B’)、ScFv-HD(A)+scFv-HD(A’)-scFv、ScFv-HD(A)-scFv+scFv-HD(A’)-scFv。

7.如权利要求4所述T细胞衔接器的制备方法，其特征在于：所述信号肽的氨基酸序列为MEWSGVFIFLLSVTAGVHS。

8.如权利要求4所述T细胞衔接器的制备方法，其特征在于：所述宿主细胞为293细胞。

9.如权利要求8所述T细胞衔接器的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)具体为：使用无血清培养基，将293细胞在37℃、5％二氧化碳、转速80r/min的摇床中悬浮培养，控制细胞密度；将HD-scFv系列质粒单独或组合后转入293细胞，连续培养一周后收取细胞培养液上清，过滤后通过亲和层析纯化蛋白；得到的蛋白产物经脱盐柱置换，获得所述T细胞衔接器。

10.如权利要求1-3任意一项所述T细胞衔接器在肿瘤治疗中的应用。