[发明专利]基于多基团修饰磁珠和荧光量子点检测古代丝织品的方法

说明书

本发明涉及考古领域，本发明公开了一种基于多基团修饰磁珠和荧光量子点检测古代丝织品的方法。本发明利用羧基和氨基共同修饰磁珠对古代丝织品中的丝素蛋白进行纯化富集，链霉亲和素化的荧光量子点与生物素化丝素蛋白抗体结合，将羧基和氨基共同修饰磁珠‑丝素蛋白复合物加入到荧光量子点复合物反应结合；用激光照射待测样本，使标记在样本上的荧光量子点发光，若不发光，则说明无丝素蛋白。本发明用多基团修饰磁珠提高丝素蛋白的提取量，丝素蛋白纯化效果好，用激光照射荧光量子点，光敏元件检测光信号检测方法灵敏、特异性好，而且操作简单、速度快。

技术领域

本发明涉及考古领域，尤其涉及一种基于多基团修饰磁珠和荧光量子点检测古代丝织品的方法。

背景技术

丝绸是中国古代文明的象征，既承载了灿烂的中华文化，也对世界产生过深远的影响。一般认为丝绸的起源可追溯到黄河中游地区的仰韶文化时期(约公元前5000-公元前3000年)，但还是缺乏可靠的证据。

通过对古代丝织品中的蚕丝蛋白进行检测可用于判断丝绸的起源。蚕丝主要有丝素蛋白和丝胶蛋白，而在制备成丝绸的过程中通常都要经过缫丝、纺纱、织造或得到精美舒适的丝绸，在缫丝过程中通常都会把丝胶蛋白脱去，只剩下主要成分丝素蛋白。大部分的丝织品都是长时间埋藏在地下的，经常会受到土壤中水分、温度、腐蚀性物质以及微生物的影响，变得破败不堪，逐渐失去了原有的丝绸的结构，甚至有些都被降解成小分子的多肽残留在泥土中，使用传统的分析方法如红外光谱、拉曼光谱、X射线等很难识别出来。因此，寻找一种检测特异性高、稳定性好、检测速度快以及丝素蛋白纯化高的方法，对于研究丝绸的起源以及劣化机理起着关键的作用。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种基于多基团修饰磁珠和荧光量子点检测古代丝织品的方法。本发明用多基团修饰磁珠提高丝素蛋白的提取量，丝素蛋白纯化效果好，用激光照射荧光量子点，光敏元件检测光信号检测方法灵敏、特异性好、，而且操作简单、速度快。

本发明的具体技术方案为：一种基于多基团修饰磁珠和荧光量子点检测古代丝织品的方法，包括以下步骤：

1)取古代丝织品40-50mg，捣碎，用5-6mL氯化钙、水和乙醇的混合液溶解并混合摇匀，得到溶解液。

2)将溶解液置于55-70℃水浴中0.5-1.5小时，离心处理。

3)吸取上清液到截留分子量为800-1200Da的透析膜中透析。

4)取透析后的溶液，在-50℃至-87℃、2-8Pa条件下离心冷冻干燥，得到丝素蛋白。

5)取丝素蛋白，加入裂解液进行裂解，混合均匀，得到裂解液，冷藏备用。

6)取含有羧基和氨基共修饰磁珠的缓冲液加入到裂解液中，混合均匀，静置吸附后，得到含有丝素蛋白-磁珠复合物的分散液，冷藏备用。

7)在外加磁场下分离得到沉淀物，用乙醇溶液进行清洗，得到丝素蛋白-磁珠复合物，冷藏备用。

8)向离心管加入含有链霉亲和素化的荧光量子点溶液，再加入生物素化丝素蛋白抗体，振荡孵育，得到荧光量子点标记的生物素化丝素蛋白抗体复合物分散液。

9)将丝素蛋白-磁珠复合物加入荧光量子点标记的生物素化的丝素蛋白抗体复合物分散液中进行反应，离心洗涤，再分散于磷酸盐缓冲溶液中，得到待测样本；用激光照射待测样本，以是否发生荧光来判断待测样本中是否含有丝素蛋白。

本发明方法利用羧基和氨基共同修饰磁珠对古代丝织品中的丝素蛋白进行纯化富集，链霉亲和素化的荧光量子点与生物素化丝素蛋白抗体结合，将羧基和氨基共同修饰磁珠-丝素蛋白复合物加入到荧光量子点复合物反应结合；用激光照射待测样本，使标记在样本上的荧光量子点发光，若不发光，则说明无丝素蛋白。