[发明专利]一种用于人脐带间充质干细胞的无血清培养基及其应用

说明书

本发明公开了一种用于人脐带间充质干细胞的无血清培养基，所述无血清培养基包括人间充质干细胞体外增殖培养基和添加至所述人间充质干细胞体外增殖培养基中的细胞培养辅助因子。通过细胞培养辅助因子的添加，代替血清在分化培养基中的使用，避免了血清化学成分不明确，存在不同批次培养基成分不稳定、易存在病毒等病原体污染、成本昂贵等问题。同时，采用本发明提供细胞化学成分明确的无血清培养基，在体外增殖中，能提高增殖效率、维持细胞分化能力并且提高细胞生产的稳定性。

技术领域

本发明属于干细胞和无血清培养基技术领域，具体地，涉及一种用于人脐带间充质干细胞体外增殖效率更高、细胞活力更高的人脐带间充质干细胞化学成分明确的无血清培养基。

背景技术

间充质干细胞(MesenchymalStemCells，MSCs)是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层，具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。间充质干细胞广泛存在于全身多种组织中铭刻在体外培养扩增，并能在特定条件下分化成心肌细胞、神经细胞及脂肪细胞等。随着国内外学者对间充质干细胞生物学特性及功能的深入研究，目前已经可以从多种组织中分离出间充质干细胞。间充质干细胞具有支持造血和调节免疫等作用，在造血重建、组织修复、免疫治疗等方面具有广阔的临床应用前景。现有的间充质干细胞培养方法使用的培养基大都含有动物血清，一方面造成成纤维细胞的污染，影响角质细胞生长，加速角质细胞分化；另一方面由于血清和成分不明的蛋白的存在，对细胞生物学、毒理学、病理学等基础研究形成干扰；同时采用添加血清的培养基构建的人工组织进行体内移植，可能引起免疫反应或引入不安全因素(如：病毒或其它病原体等)，因此需要开发化学成分明确的无血清培养基。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种化学成分明确的无血清培养基。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种一种用于人脐带间充质干细胞的无血清培养基，其特征在于，所述无血清培养基包括人间充质干细胞体外增殖培养基和添加至所述人间充质干细胞体外增殖培养基中的细胞培养辅助因子，其中，所述细胞培养辅助因子为甘氨酸、维生素C、L-精氨酸盐酸盐、L-胱氨酸、叶酸、烟酰胺、胰岛素、盐酸吡哆醇、核黄素、肌醇、氯化钙(CaCl₂)、硝酸铁(Fe(NO₃)₃·9H₂O)、硫酸镁、氯化钾(KCl)、碳酸氢钠、氯化钠(NaCl)、磷酸二氢钠(磷酸二氢钠-H₂O)的中的至少一种，上述任一添加的细胞培养补充因子的浓度为0.5μg/mL-6400mg/ml。

其中，所述人间充质干细胞体外增殖培养基包括人脐带间充质干细胞基础培养基和青霉素链霉素双抗溶液，所述人脐带间充质干细胞基础培养基和青霉素链霉素双抗溶液的体积比为99:1。

所述人脐带间充质干细胞基础培养基选自DMEM培养基、MEM培养基、DMEM/F12培养基、F10培养基中的任意一种。上述培养基均不含胎牛血清。

优选地，所述的青霉素-链霉素双抗溶液中，青霉素的含量为10000U/ml，链霉素的含量为10mg/ml。

优选地，所述细胞培养辅助因子为甘氨酸、维生素C、L-精氨酸盐酸盐、L-胱氨酸、叶酸、烟酰胺、胰岛素、盐酸吡哆醇、核黄素、肌醇、氯化钙(CaCl₂)、硝酸铁(Fe(NO₃)₃·9H₂O)、硫酸镁、氯化钾(KCl)、碳酸氢钠、氯化钠(NaCl)和磷酸二氢钠(磷酸二氢钠-H₂O)的组合。

优选地，所述细胞培养辅助因子的添加量为：甘氨酸30.0mg/mL、维生素C