[发明专利]一种用于人脐带间充质干细胞的无血清培养基及其应用

权利要求书

1.一种用于人脐带间充质干细胞的无血清培养基，其特征在于，所述无血清培养基包括人间充质干细胞体外增殖培养基和添加至所述人间充质干细胞体外增殖培养基中的细胞培养辅助因子，其中，所述细胞培养辅助因子为甘氨酸、维生素C、L-精氨酸盐酸盐、L-胱氨酸、叶酸、烟酰胺、胰岛素、盐酸吡哆醇、核黄素、肌醇、氯化钙、Fe(NO₃)₃·9H₂O、硫酸镁、氯化钾、碳酸氢钠、氯化钠、磷酸二氢钠-H₂O的中的至少一种，上述任一添加的细胞培养补充因子的浓度为0.5μg/mL-6400mg/ml。

2.根据权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于，所述人间充质干细胞体外增殖培养基包括人脐带间充质干细胞基础培养基和青霉素链霉素双抗溶液，所述人脐带间充质干细胞基础培养基和青霉素链霉素双抗溶液的体积比为99:1。

3.根据权利要求2所述的无血清培养基，其特征在于，所述人脐带间充质干细胞基础培养基选自DMEM培养基、MEM培养基、DMEM/F12培养基、F10培养基中的任意一种。

4.根据权利要求2所述的无血清培养基，其特征在于，所述的青霉素-链霉素双抗溶液中，青霉素的含量为10000U/ml，链霉素的含量为10mg/ml。

5.根据权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于，所述细胞培养辅助因子为甘氨酸、维生素C、L-精氨酸盐酸盐、L-胱氨酸、叶酸、烟酰胺、胰岛素、盐酸吡哆醇、核黄素、肌醇、氯化钙、Fe(NO₃)₃·9H₂O、硫酸镁、氯化钾、碳酸氢钠、氯化钠和磷酸二氢钠-H₂O的组合。

6.根据权利要求5所述的无血清培养基，其特征在于，所述细胞培养辅助因子的添加量为：甘氨酸 30.0mg/mL、维生素C 10 ng/ ml、L-精氨酸盐酸盐 84.0mg/mL、L-胱氨酸63.0mg/mL、叶酸 4.0mg/mL、烟酰胺 4.0mg/mL、胰岛素 5 μg/mL、盐酸吡哆醇 4.0mg/mL、核黄素 0.4mg/mL、肌醇 7.2mg/mL、氯化钙 200.0mg/mL、Fe(NO3)3·9H₂O 0.1mg/mL、硫酸镁97.67mg/mL、氯化钾 400.0mg/mL、碳酸氢钠 3700.0mg/mL、氯化钠 6400.0mg/mL、磷酸二氢钠-H₂O 125.0mg/mL。

7.权利要求1-6任一项所述的无血清培养基在对人脐带间充质干细胞进行体外增殖的应用。

8.一种人间充质干细胞体外增殖培养方法，其特征在于，包括下列步骤：

1）取经过纯化后的人间充质干细胞，

2）在培养皿中添加权利要求1-6任一项所述的无血清培养基，接种人间充质干细胞；

3）2天后吸去所述无血清培养基后，重新补充所述，继续培养；

4）细胞于3天后统计增殖倍数和细胞活力。

9.根据权利要求8所述的培养方法，其特征在于，其中，细胞培养的环境条件为在CO₂培养箱中37℃培养，CO₂培养箱中CO₂浓度为5%（v/v）。

10.利用权利要求8-9任一项所述的方法培养得到的人间充质干细胞。