[发明专利]一种脱细胞心包膜及其制备方法和用途

说明书

本申请提供了一种脱细胞心包膜的制备方法，采用特定的前处理、消毒、脱脂、脱细胞以及冻干处理相结合的方法，在有效去除动物组织抗原性物质的同时，还能最大限度的保留材料中生物活性成分和结构的完整性，同时在制备过程中还可以有效复合预防粘连产生的无机金属离子、多糖和药物，制备得到的脱细胞心包膜具有天然的粗糙面和光滑面，光滑面的纤维结构紧密，能有效阻隔粘连组织的侵入，且不影响肌腱的功能；粗糙面允许组织长入，利于快速血管化，修复肌腱；同时脱细胞心包膜负载功能性成分，起到更好的促进肌腱愈合和预防粘连产生的效果。

技术领域

本申请涉及生物医用材料技术领域，特别是涉及一种脱细胞心包膜及其制备方法和用途。

背景技术

肌腱损伤后粘连形成是临床上难以解决的问题，由于缺乏有效的粘连防治措施，常常使治疗陷入“粘连—松解—再粘连”的恶性循环，严重影响了患者的肢体功能康复。应用物理屏障阻断外源性愈合是预防肌腱粘连的主要方法，早期应用的非生物材料如硅胶、金箔等，因存在组织反应大、排异明显、无通透性、影响肌腱的内源性愈合、需二次手术取出等不足，已被淘汰。随着材料科学的发展，研究者们将研究转向了可吸收高分子化合物，如壳聚糖、透明质酸及其衍生物、胶原、丝素蛋白、聚乳酸。可吸收高分子化合物本身所具有的良好的降解性和生物相容性，允许营养物质、细胞因子等通过，不会影响局部肌腱营养，在肌腱防粘连的预防中取得了更好的效果。然而这些传统的材料仍区别于天然的组织结构，存在种种不足。

随着再生医学与组织工程技术的发展，对肌腱防粘连膜的功能和结构提出了越来越高的要求，除了具有良好的生物相容性和防粘连效果，还要具备与细胞外基质相似的作用，为细胞提供特殊的生理条件，以产生所需的细胞反应，促进损伤肌腱的功能修复。脱细胞基质材料因其保持了与细胞外基质固有的结构和成分，具有较高的生物活性和较低的免疫原性，在组织工程领域受到了广泛关注。目前，通过脱细胞技术获得的脱细胞基质材料已广泛用于人体组织重建，如心脏瓣膜、皮肤和硬脑膜等。脱细胞心包膜具有优异的生物相容性和组织粘附性，与此同时，脱细胞心包膜很好的保持了天然组织致密的胶原结构和力学性能，可以有效屏障外源性愈合，便于手术操作。但目前已报道的用于肌腱修复和预防粘连产生的脱细胞心包膜大多作用单一，效果并不理想。因此，需要开发效果更好的脱细胞心包材料制备肌腱防粘连膜，以及有多功能的肌腱防粘连产品，实现更好治疗效果。

发明内容

本申请的目的在于提供一种脱细胞心包膜及其制备方法，用以解决肌腱损伤后粘连形成问题。

本申请第一方面提供了一种脱细胞心包膜的制备方法，其包括以下步骤：

前处理：取新鲜的动物心包组织，去除附属脂肪，获得心包组织；

消毒：按照料液质量体积比1g：1-10mL将所述心包组织与消毒剂混合，处理1-4小时；其中，所述消毒剂选自0.1-0.2wt％过氧乙酸溶液、0.01-0.1wt％二氧化氯溶液，1-10wt％过氧化氢溶液中的至少一种；

脱脂：按照料液质量体积比1g：1-10mL将所述心包组织与脱脂剂混合，超声处理1-4小时；其中，所述脱脂剂选自100wt％异丙醇溶液、100wt％丙酮溶液、0.1-1mol/L氢氧化钠溶液、0.1-1mol/L氢氧化钾溶液中的至少一种；

脱细胞：按照料液质量体积比1g：1-10mL将所述心包组织与脱细胞试剂混合，处理1-48小时；再按照料液质量体积比1g：1-10mL将脱细胞试剂处理后的心包组织与1-10U/mL脱氧核糖核酸酶(DNase)溶液混合，处理2-48小时，得到脱细胞心包膜；其中，所述脱细胞试剂选自0.1-1mol/L氢氧化钠溶液、0.1-1wt％胰蛋白酶溶液、0.1-2wt％Triton X-100(曲拉通)溶液、0.1-1wt％脱氧胆酸钠溶液中的至少一种；

冻干处理：将所述脱细胞心包膜在-20℃～-80℃冷冻固定1-4小时，置于冷冻干燥机工作室，开启冷凝室制冷，使冷凝室温度达到-10℃～-56℃，开启真空泵，真空冷冻干燥。