[发明专利]一种脱细胞心包膜及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种脱细胞心包膜的制备方法，其包括以下步骤：

前处理：取新鲜的动物心包组织，去除附属脂肪，获得心包组织；

消毒：按照料液质量体积比1g：1-10mL将所述心包组织与消毒剂混合，处理1-4小时；其中，所述消毒剂选自0.1-0.2wt％过氧乙酸溶液、0.01-0.1wt％二氧化氯溶液，1-10wt％过氧化氢溶液中的至少一种；

脱脂：按照料液质量体积比1g：1-10mL将所述心包组织与脱脂剂混合，超声处理1-4小时；其中，所述脱脂剂选自100wt％异丙醇溶液、100wt％丙酮溶液、0.1-1mol/L氢氧化钠溶液、0.1-1mol/L氢氧化钾溶液中的至少一种；

脱细胞：按照料液质量体积比1g：1-10mL将所述心包组织与脱细胞试剂混合，处理1-48小时；再按照料液质量体积比1g：1-10mL将脱细胞试剂处理后的心包组织与1-10U/mLDNase溶液混合，处理2-48小时，得到脱细胞心包膜；其中，所述脱细胞试剂选自0.1-1mol/L氢氧化钠溶液、0.1-1wt％胰蛋白酶溶液、0.1-2wt％Triton X-100溶液、0.1-1wt％脱氧胆酸钠溶液的至少一种；

冻干处理：将所述脱细胞心包膜在-20℃～-80℃冷冻固定1-4小时，置于冷冻干燥机工作室，开启冷凝室制冷，使冷凝室温度达到-10℃～-56℃，开启真空泵，真空冷冻干燥。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的消毒、脱脂、脱细胞步骤完成后，各自还包括采用清洗剂进行清洗；所述清洗剂选自纯水、0.01-0.2mol/L PBS缓冲液、0.9wt％氯化钠溶液中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述心包组织与脱细胞试剂混合处理完成后采用0.01-0.2mol/L PBS缓冲液漂洗至中性；所述心包组织与DNase溶液混合处理完成后采用0.01-0.2mol/L PBS缓冲液去除残留的DNase溶液，再用纯水清洗去除PBS缓冲液。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的制备方法，其特征在于，还包括：

无机金属离子添加：按照料液质量体积比1g：1-10mL将所述脱细胞心包膜与0.01-20mmol/L无机金属离子溶液混合，处理6-24小时；其中，所述无机金属离子溶液选自镁离子溶液、铜离子溶液、锌离子溶液、银离子溶液中的至少一种。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的制备方法，其特征在于，还包括：

多糖添加：按照料液质量体积比1g：1-10mL将所述脱细胞心包膜与100-1000μg/mL的多糖溶液混合，处理4-24小时；其中，所述多糖溶液选自硫酸软骨素溶液、肝素、透明质酸、壳聚糖中的至少一种。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其特征在于，还包括：

药物添加：按照料液质量体积比1g：0.1-1mL在所述脱细胞心包膜的光滑面使用0.001-1mg/mL的负载药物的溶液做涂层处理；其中，所述药物选自吡非尼酮、去铁胺、姜黄素、人参皂苷中的至少一种。

7.根据权利要求4-6中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述无机金属离子溶液选自镁离子溶液；所述多糖溶液选自硫酸软骨素溶液；所述药物选自吡非尼酮。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述脱细胞心包膜来源于动物，所述动物选自猪、牛、马、羊、狗、骡、非人灵长类动物中的至少一种，优选为猪、牛、羊。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的制备方法制备的脱细胞心包膜。

10.根据权利要求1-8中任一项所述的制备方法制备的脱细胞心包膜在用于预防和/或治疗肌腱粘连中的用途。