[发明专利]基于HRM检测幽门螺杆菌呋喃唑酮耐药基因的引物及方法在审
| 申请号： | 202310265032.3 | 申请日： | 2023-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN116287340A | 公开（公告）日： | 2023-06-23 |
| 发明（设计）人： | 刘国栋;王琦;王南苗 | 申请（专利权）人： | 苏州长柏生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京世衡知识产权代理事务所(普通合伙) 11686 | 代理人： | 吴紫璇 |
| 地址： | 215558 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 hrm 检测 幽门 螺杆 呋喃 耐药 基因 引物 方法 | ||
1.一种基于PCR-HRM检测幽门螺杆菌呋喃唑酮耐药基因的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括六条引物，分别为HPporD-HRM-F、HPporD-HRM-R、HPoorD112-HRM-F、HPoorD112-HRM-R、HPoorD335-HRM-F、HPoorD335-HRM-R；其中，HPporD-HRM-F的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，HPporD-HRM-R的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，HPoorD112-HRM-F的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，HPoorD112-HRM-R的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，HPoorD335-HRM-F的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，HPoorD335-HRM-R的核苷酸序列如SEQID No.6所示。
2.含有权利要求1所述的引物组合的试剂盒。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括HRM Analysis PreMix、阴性对照或阳性对照中的一种或多种；所述阴性对照为呋喃唑酮敏感的幽门螺杆菌DNA，所述阳性对照为呋喃唑酮耐药的幽门螺杆菌DNA。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述HRM Analysis PreMix中饱和染料为Eva Green。
5.一种基于PCR-HRM检测幽门螺杆菌呋喃唑酮耐药基因的方法，其特征在于，以样品DNA为模板，以权利要求1所述的引物组合进行PCR-HRM检测，同时设立阴性对照和阳性对照，最后根据溶解曲线来判定结果。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，PCR-HRM检测反应程序为：95℃预变性2min，1个循环；95℃变性10s，54℃～60℃退火30s，40个循环；溶解曲线分析。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，退火温度为58℃。
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