[发明专利]包括使用多核苷酸报道分子和跨膜孔的确定靶分析物的存在或不存在的方法

权利要求书

1.一种确定样品中靶分析物存在或不存在的方法，所述方法包括：

(a)将所述样品中存在的任何靶分析物固定在表面上；

(b)使所述表面与以下接触：(i)与靶分析物特异性结合的第一检测剂；和(ii)多核苷酸报道分子，其中所述多核苷酸报道分子与第一检测剂结合着或结合；和

(c)使跨膜孔与通过第一检测剂与所述靶分析物的结合固定在所述表面上的任何多核苷酸报道分子接触，并使用所述跨膜孔检测所述多核苷酸报道分子，从而确定所述样品中所述靶分析物的存在或不存在。

2.根据权利要求1所述的方法，其包括确定所述样品中所述靶分析物的浓度。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中:

(ⅰ)通过结合特异性结合所述靶分析物的捕获剂将所述靶分析物固定在所述表面上，该捕获剂被固定在所述表面上；

(ⅱ)通过与抗体结合将所述靶分析物固定在所述表面上，该抗体被固定在所述表面上，可选地，其中所述抗体特异性结合所述靶分析物。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中：

(ⅰ)所述靶分析物是靶抗体；和/或

(ⅱ)所述第一检测剂包含抗体。

5.根据权利要求4所述的方法，其中：(a)第一检测剂是与所述靶抗体结合的抗体，并且所述捕获剂是所述靶抗体结合的抗原；或者(b)第一检测剂是所述靶抗体结合的抗原，并且所述捕获剂是与所述靶抗体结合的抗体。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中：

(ⅰ)所述多核苷酸报道分子间接地与第一检测剂结合着或结合，可选地，其中所述多核苷酸报道分子通过结合第一剂的第二检测剂与第一检测剂结合着或结合，可选地，其中所述第二检测剂包含抗体；和/或

(ⅱ)第一检测剂或第二检测剂包含：

(A)亲和标签的第一组分和(Ⅰ)所述多核苷酸报道分子与特异性结合所述第一组分的亲和标签的第二组分连接；或(Ⅱ)所述多核苷酸报道分子与亲和标签的第一组分连接，并且与第一组分特异性结合的亲和标签的第二组分用于将第一检测剂或第二检测剂与所述多核苷酸报道分子连接，可选地，其中所述亲和标签的第一组分是生物素，所述亲和标签的第二组分是链霉抗生物素蛋白；或

(B)与所述多核苷酸报道分子的至少部分杂交的寡核苷酸。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中两种或更多种多核苷酸报道分子与第一检测剂结合着或结合，可选地，其中两种或更多种多核苷酸报道分子是相同的。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，包括确定所述样品中两种或多种靶分析物的存在或不存在，其中使用不同的多核苷酸报道分子检测每种靶分析物，并使用所述跨膜孔确定所述多核苷酸报道分子的成分。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述两种或更多种靶分析物：

(ⅰ)被固定在单独的表面上；或

(ⅱ)被固定在同一表面上；可选地，其中(A)每种所述多核苷酸报道分子仅与一种特异性结合一种靶分析物的第一检测剂结合，或(B)所述多核苷酸报道分子在步骤(b)之前与第一检测剂结合。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中：

(ⅰ)所述样品来自个体，并且在步骤(c)中，所述跨膜孔用于同时分析来自所述个体的一种或多种多核苷酸，可选地，其中所述一种或多种多核苷酸是所述个体的外显子组或转录组的一部分；和/或

(ⅱ)所述靶分析物是疾病生物标志物。