[发明专利]一种用于治疗视神经损伤的外泌体滴眼液及其制备方法

权利要求书

1.一种用于治疗视神经损伤的外泌体滴眼液，其特征在于，其原料成分包括以下质量分数的组分：间充质干细胞外泌体2％～8％、维生素E 0.2％～0.8％、玻璃酸钠0.5％～1.5％、卡波姆0.1％～0.5％。

2.根据权利要求1所述的外泌体滴眼液，其特征在于，间充质干细胞外泌体的质量分数是：间充质干细胞外泌体3％、维生素E 0.5％、玻璃酸钠0.7％、卡波姆0.1％。

3.根据权利要求1所述的外泌体滴眼液，其特征在于，间充质干细胞外泌体的质量分数是：间充质干细胞外泌体5％、维生素E 0.5％、玻璃酸钠0.7％、卡波姆0.1％。

4.根据权利要求1或2或3所述的外泌体滴眼液，其特征在于，还包括质量分数是0.1％～3.0％。

5.根据权利要求4所述的外泌体滴眼液，其特征在于，还包括质量分数是86.2％～97.5％的注射用水。

6.一种用于治疗视神经损伤的外泌体滴眼液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、间充质干细胞的培养：人脐带间充质干细胞MSCs以1×10⁵/cm²的密度接种于培养瓶中，培养基用完全间充质干细胞培养基，将细胞培养瓶置于37℃、5％CO₂孵育箱中培养；

倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化，待细胞长至培养瓶底60％面积时，换液培养，加无血清间充质干细胞培养液，48h后，收集培养上清液，合并于4℃冷藏备用；

S2、外泌体的提取：将人脐带间充质干细胞MSCs培养上清液收集至50ml离心管中，4℃、300g离心10mim，以去除死细胞；将上清液转移至新的离心管中，4℃、2000g离心10min，以去除大的细胞碎片；将上清液转移至新的离心管中，4℃，10000g离心30min，以去除细胞器及小颗粒；

小心将上清液转移至无菌超速离心管中，进行第一次超速离心，4℃、100000g离心70min；用移液器将上清小心的移除，离心管底的沉淀用无菌PBS重悬，进行第二次超速离心，4℃、100000g离心70min；用移液器将上清小心的移除，得到的沉淀为外泌体。根据收集培养基的体积，按照每50mL收集的培养基最终使用不超过50μL的PBS重悬的要求加入适量无菌PBS重悬，然后用0.22μm离心式过滤器过滤；获得的无菌外泌体重悬液用BCA蛋白定量试剂盒检测总蛋白浓度，将无菌外泌体重悬液分装于无菌EP管中，置于-80℃环境保存；

S3，辅配料的配制：将质量总量的0.2％～0.8％的维生素E、0.5％～1.5％玻璃酸钠、0.1％～0.5％卡波姆粉末混和均匀，紫外线消毒杀菌；

S4，滴眼液的配制：用质量总量的50％的注射用水溶解消毒后的玻璃酸钠和卡波姆的混和粉末，边加边搅拌，持续搅拌60分钟后，加入质量总量的2％～8％的间充质干细胞外泌体，最后加入生理盐水调节渗透压，测量PH值，使用PH调节剂将PH值调至6～7.5，补足注射用水，持续搅拌12h后，滤去不溶杂质，以2mL每支分装，密封得成品。

7.根据权利要求6所述的外泌体滴眼液的制备方法，其特征在于，S1中所述完全间充质干细胞培养基是90％间充质干细胞培养液+10％FBS。

8.根据权利要求6所述的外泌体滴眼液的制备方法，其特征在于，S1中所述人脐带间充质干细胞为3～6代的人脐带间充质干细胞。

9.根据权利要求6所述的外泌体滴眼液的制备方法，其特征在于，S3中所述射线消毒杀菌时间为30分钟。

10.根据权利要求6所述的外泌体滴眼液的制备方法，其特征在于，S4中所述滴眼液成品于2～8℃保存。