[发明专利]疮痂链霉菌噬菌体φS102的应用

权利要求书

1.疮痂链霉菌噬菌体在防治链霉菌中的应用，其特征在于，疮痂链霉菌噬菌体的保藏编号为CCTCC NO:M 2021379。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，疮痂链霉菌噬菌体的分离纯化包括以下步骤：

(1)样品前处理：

将有病斑的马铃薯表皮部位刮下来进行研磨后，加入蒸馏水，30℃、170rmp震荡培养6-8h后取上清液，将上清液4000r/min离心10min后过滤，得到含有噬菌体的样液；

(2)准备宿主菌：

将平板上生长良好的链霉菌单菌落接种于高氏液体培养基中，以170r/min、30℃培养至对数生长早期，备用；

(3)噬菌体的增殖分离

取10mL含有噬菌体的样液加入到30mL高氏一号液体培养基中，并加入1mL处于对数期生长早期的宿主菌菌悬液，加入一定量的氯化钙，充分混匀后使体系的氯化钙终浓度为10mmol/L，30℃、170r/min震荡培养过夜，得到培养液在4℃、10000r/min离心10min，收集上清液后过滤，得到噬菌体富集液；

在无菌超净台中吸取100μL的宿主菌液均匀地涂在高氏固体培养基平板上，静置15min，接着吸取SM液稀释10-1000倍的噬菌体富集液100μL到涂了宿主菌液的平板上，将其均匀涂布，静置15min后倒置培养，过夜，形成噬菌斑；

(4)噬菌体的纯化

用无菌的牙签挑取大小均匀且透亮的单一噬菌斑放置于1mL的SM液中，30℃、170r/min震荡培养后过滤，滤液经无菌SM液稀释10³-10⁶倍后，继续涂板，按照以上的操作进行纯化，重复多次，得到纯化后的噬菌斑；

挑取均匀透亮单一的噬菌斑置于SM液中，经过震荡培养过滤后，得到纯化噬菌体溶液。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤(2)中，所述链霉菌为S.scabies、S.galilaeus、S.bobili中的任意一种。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤(4)中，噬菌体溶液置于4℃进行保存，每半年复苏一次。

5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤(4)中，将噬菌体溶液与60％的甘油以1:2的比例混合后，放入到冻存管在-80℃长期保存，定期复苏。

6.疮痂病的防治方法，其特征在于，所述防治方法包括对植物施用疮痂链霉菌噬菌体的步骤，其中，疮痂链霉菌噬菌体的保藏编号为CCTCC NO:M 2021379。

7.根据权利要求6所述的防治方法，其特征在于，所述植物为马铃薯。

8.根据权利要求6或7所述的防治方法，其特征在于，所述防治方法为将马铃薯的种薯浸泡于疮痂链霉菌噬菌体悬浊液中，浸泡时间为24h。

9.根据权利要求6所述的防治方法，其特征在于，所述疮痂病为马铃薯疮痂病。