[发明专利]一种诱导基因表达的茎环DNA结构及其应用

权利要求书

1.一种诱导基因表达的茎环DNA结构，其特征在于，具体是针对特定的指标基因X，设计基因X第一个外显子(Exon1)的反义序列(E1-AS)，然后在两端添加5-10个G和C组成的多聚序列，最终形成20-40nt的茎环DNA(StemDNA)结构；该茎环DNA(StemDNA)结构组成为：

C(n)-靶向序列(Tarseq:E1-AS)-G(n)。

2.根据权利要求1所述的一种诱导基因表达的茎环DNA结构，其特征在于，所述基因X选取为TNF基因，设计该TNF基因的第一外显子的反义序列，然后在两端添加9个G和C组成的多聚序列，最终形成38nt的茎环DNA(StemDNA)结构，对应的序列如下SEQ ID NO.1所示：

TNF–AS1:CCCCCCCCCTACTCGTGACTTTCGTACTAGGGGGGGGG(SEQ ID

NO.1)。

3.根据权利要求2所述的一种诱导基因表达的茎环DNA结构，其特征在于，设计识别反向PCR扩增引物，扩增所述TNF基因的接口及侧翼序列引物序列为：

TNF-Primer F：CCTCTCTCTAATCAGCCCTCTG(SEQ ID NO.2)；

TNF-Primer R：GAGGACCTGGGAGTAGATGAG(SEQ ID NO.3)；

GAPDH-Primer F：GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT(SEQ ID NO.4)；

GAPDH-Primer R：GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG(SEQ ID NO.5)。

4.根据权利要求1所述的一种诱导基因表达的茎环DNA结构，其特征在于，所述基因X选取为NEUROD1基因，设计该NEUROD1基因的第一个外显子的反义序列，然后在两端添加9个G和C组成的多聚序列，最终形成38nt的茎环DNA(StemDNA)结构，对应的序列如下SEQ IDNO.6所示：

NEUROD1–AS1:CCCCCCCCCTACTGGTTTAGCATGTCGCTGGGGGGGGG(SEQ ID NO.6)。

5.根据权利要求3所述的一种诱导基因表达的茎环DNA结构，其特征在于，设计识别反向PCR扩增引物，扩增所述NEUROD1基因的接口及侧翼序列引物序列为：

NEUROD1-Primer F：ATGACCAAATCGTACAGCGAG(SEQ ID NO.7)；

NEUROD1-Primer R：GAGGACCTGGGAGTAGATGAG(SEQ ID NO.8)；

GAPDH-Primer F：GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT(SEQ ID NO.4)；

GAPDH-Primer R：GTTCATGGCTTCGAGGTCGT(SEQ ID NO.5)。

6.根据权利要求1-5任一项所述的一种诱导基因表达的茎环DNA结构的应用，其特征在于，所述应用具体为用于制备促进人类非小细胞肺癌细胞系H1299、人结肠癌细胞系SW480、人类胶质瘤细胞系U251以及人脑胶质母细胞瘤细胞系DBTRG的凋亡效的的药物。