[发明专利]一种用于检测猪呼吸系统疾病五种主要病原细菌的LAMP引物组合及应用

说明书

本发明属于疾病检测技术领域，涉及用于检测猪呼吸系统五种主要细菌性病原微生物的LAMP引物组合及应用。本发明所述LAMP引物组包括外引物对F3/B3、内引物对FIP/BIP、环引物对LF/BF，共计5套。本发明所提供的用于检测猪呼吸系统主要细菌性病原微生物的引物组合设计主要是针对Hp的infB、Mh16sRNA、Pm‑toxinA、Bb的DNT、APP的ApxIV相对保守特异的五个基因序列，并作为该发明的应用检测靶基因，设计的实时荧光环介导等温扩增引物组特异性与实用性强，能够实现发病或亚临床感染的呼吸系统源的同一临床样本检测，用时短。

技术领域

本发明属于疾病检测技术领域，具体涉及一种用于检测猪呼吸系统疾病五种主要病原细菌的LAMP引物组合及应用。

背景技术

随着养猪业规模化程度的提升，猪群疾病发生的概率增加，因而对生猪传染类疾病的防控带来新的挑战。猪呼吸道疾病是近年来严重危害养猪业的疾病之一。该病的死亡率已占到了30％左右，主要发生在冬季。使得猪群饲料利用率降低，日增重达不到标准，猪出栏时间推迟、药物的费用增加等，有的甚至造成相当数量的猪只死亡，给我国养猪业带来巨大损失。就现阶段猪病流行的状况调查看，多种病原菌的混合感染是目前猪场疾病发展的一个趋势。而可引起猪呼吸系统疾病的细菌主要包括猪支气管败血波氏杆菌、猪多杀性巴氏杆菌、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌等。

鉴于生物安全和动物源肉品安全，减抗替抗已纳入国家食品安全法规。而猪源疾病多元化的发展趋势，不仅增加疾病的防控难度，同时影响猪肉安全。为了防控猪源细菌性疾病发生而带来的抗生素使用带来的负面影响，建立对规模化猪场发病猪的呼吸系统混合病原菌感染的快速检测与预警，及早制定治疗与防控措施至关重要。针对猪病原菌的检测技术主要包括传统的微生物学诊断技术、血清学诊断技术和分子生物学诊断技术。尽管以PCR为代表的分子生物学诊断技术及其衍生检测技术占据主体，但均存在这样或那样的局限性，如检测流程繁琐、工作量大、检测仪器要求高、容易污染、样品采集针对性不强、覆盖面不够等等。因此，开发一种能够同时检测统一来源的样品，进行多种病原菌的快速简便检测方法具有重要的实践意义。

发明内容

本发明提供一种用于检测猪呼吸系统疾病五种主要病原细菌的LAMP引物组合及应用。具体通过以下技术方案实现：

所述用于检测Hp infB基因的引物组合物，包括以下引物：F3的核苷酸序列如SEQID NO.1所示，B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，BIP的核苷酸序序列如SEQ ID NO.4所示。

F3(SEQ ID No.1)：TCGGTGCATATCACGTTGAA；

B3(SEQ ID No.2)：GCTTTCGCGTGTTGGATTG；

FIP(SEQ ID No.3)：

GCATTGAGGTAAATGCCGCGTGACCGACGACGGTAAGATGA；

BIP(SEQ ID No.4)：

CGTGGTGCGAAAGCAACGGACATTACGCCATCGTCAGCT。

所述用于检测Mh 16s RNA基因的引物组合物，其特征在于，包括以下引物：所述F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，BIP的核苷酸序序列如SEQ ID NO.8所示；所述LF的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，BF的核苷酸序序列如SEQ ID NO.10所示。

F3(SEQ ID No.5)：ACCAAGAAATGGGGGTGC；

B3(SEQ ID No.6)：CCCGAAAGACTTCATCCTGC；