[发明专利]一种用于检测猪呼吸系统疾病五种主要病原细菌的LAMP引物组合及应用

权利要求书

1.一种用于检测猪呼吸系统五种主要细菌性病原微生物Mh、Pm、Hp、Bb、APP的LAMP引物组合，其特征在于，所述引物组合包括内引物对F3/B3、内引物对FIP/BIP、环引物对LF/BF，其中，

⑴Hp：所述F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，BIP的核苷酸序序列如SEQ IDNO.4所示；

⑵Mh：所述F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

所述FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，BIP的核苷酸序序列如SEQ IDNO.8所示；

所述LF的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，BF的核苷酸序序列如SEQ IDNO.10所示；

⑶Pm：所述F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；

所述FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，BIP的核苷酸序序列如SEQ ID NO.14所示；

⑷Bb：所述F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示；

所述FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示，BIP的核苷酸序序列如SEQ ID NO.18所示；

所述LF的核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示，BF的核苷酸序序列如SEQ IDNO.20所示；

⑸APP：所述F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示，B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示；

所述FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示，BIP的核苷酸序序列如SEQ ID NO.24所示；

所述LF的核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示。

2.如权利要求1所述的LAMP引物组合，其特征在于，

Hp：所述引物合是针对副猪嗜血杆菌的infB基因保守区设计；

Mh：所述引物合是针对猪肺炎支原体的16s RNA基因保守区设计；

Pm：所述引物合是针对产毒多杀性巴氏杆菌的toxA基因保守区设计；

Bb：所述引物合是针对猪败血波氏杆菌的DNT基因保守区设计；

APP：所述引物合是针对胸膜肺炎放线杆菌的APX IV基因保守区设计。

3.一种用于环介导等温扩增检测检测猪呼吸系统五种主要细菌性病原微生物Hp、Mh、Pm、Bb、APP的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的引物组合。

4.根据权利要求3所述一种用于检测猪呼吸系统五种主要细菌性病原微生物基因的试剂盒，其特征在于，在环介导等温扩增方法中，引物组合物F3、B3、FIP、BIP、LF和LB的摩尔浓度比为1：1：4-8：4-8：2-3：2-3。

5.根据权利要求3所述的一种用于检测猪呼吸系统五种主要细菌性病原微生物基因的试剂盒，其特征在于，所述的环介导等温扩增反应条件为62-65℃，时间50-60min。

6.权利要求1所述的引物组合物的应用，其特征在于，源于发病或亚临床感染呼吸系统的同一临床样本五种细菌的基因检测试剂盒或芯片中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的试剂盒或芯片的检测步骤如下：

⑴提取待测细菌或呼吸系统源待检样品中基因组DNA；

⑵以步骤(1)提取的基因为模板，采用上述引物组合物分别对Mh的infB、Mh-16s RNA、Pm toxinA、Bb的DNT、APP的Apx IV进行荧光环介导等温扩增。