[发明专利]一种从发酵液中提取高纯度高含量硫酸多粘菌素B单组分的方法

说明书

本发明公开了一种从发酵液中提取高纯度高含量硫酸多粘菌素B单组分的方法，包括以下步骤：（1）发酵液过滤后得到过滤液；（2）调节过滤液的pH，过滤得到除钙液；（3）除钙液经过交换树脂吸附、洗杂、洗脱，得到洗脱液；（4）调节洗脱液pH，脱色过滤得到脱色液；（5）调节脱色液pH，采用中低压分离柱对脱色液进行各组分单体分离，分别收集得到硫酸多粘菌素B各组分B1、B1‑I、B2和B3洗脱液，最终得到硫酸多粘菌素B各组分成品；本发明从发酵液中得到高纯度高含量的硫酸多粘菌素B1、B1‑I、B2和B3 4种单组分产品，产品的纯度＞99.0%、含量＞99.0%，适合大规模工业生产。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体是一种从发酵液中提取高纯度高含量硫酸多粘菌素B单组分的方法。

背景技术

硫酸多粘菌素B(多粘菌素B)英文名：Polymyxin B Sulfate(Aerosporin)，系由多粘芽胞杆菌产生的一组由多种氨基酸和脂肪酸组成的碱性多肽类抗生素，于1947年被发现。除变形杆菌属外，硫酸多粘菌素B对几乎所有的革兰氏阴性细菌都有抗菌作用，多粘菌素对生长繁殖期和静止期的细菌都有效。多粘菌素B抗菌谱对大肠埃希菌、肠杆菌属、沙门氏菌属、克雷伯菌属流感杆菌等，特别是对铜绿假单胞菌属鲍曼不动菌属有高度敏感，并且对绿脓杆菌有高效，曾经是抗绿脓杆菌的首选药物，但是由于其毒副作用较大，只是局部用于敏感菌的眼、耳、皮肤、粘膜感染及烧伤绿脓杆菌感染。

近年来，随着超级细菌，即对几乎所有抗菌药物耐药的院内泛耐药菌的出现，临床治疗面临严重威胁。目前，耐多药革兰阴性杆菌感染，如铜绿假单胞菌和鲍氏不动杆菌的感染，由于病原菌对许多抗菌药物存在天然耐药，且极易获得耐药性，成为治疗的难点。近期，除了替加环素批准用于治疗耐多药鲍氏不动杆菌(但该药对铜绿假单胞菌无效)外，就再也没有其他新研发的针对耐多药革兰阴性杆菌感染的药物了。多粘菌素作为治疗革兰阴性菌的最后一道防线再次受到重视。

由于硫酸多粘菌素B是目前对付超级细菌的有效药物，因而备受关注，但是，由于B1、B2、B3和B1-I四个组分及其他杂质具有的肾毒性，严重影响了硫酸多粘菌素B的临床用药。

硫酸多粘菌素B为多组分产品，包括B1、B2、B3和B1-I四个组分(结构式见附图1)以及其他杂质。USP/EP标准及中国药典规定硫酸多粘菌素B含量≥80％，并且对相关组分及杂质进行了规定，要求最大单杂≤3.0％、总杂≤17％、B3≤6.0％、B1-I≤15％。从各国药典的要求可以看出，B1、B2、B3和B1-I四个组分均为多粘菌素B的有效组分。

为了拓展硫酸多粘菌素的用途，有必要对其四个组分(B1、B2、B3、B1-I)进行单独分离，得到高纯度高含量单一的组分后，对其肾毒性及抗菌性进行临床定量研究，获得明确数据后供临床指导使用，特别是注射用药。高纯度、高含量硫酸多粘菌素B1、B2、B3、B1-I组分的获得，对于将来此类新药的开发将会提供帮助。

基于以上，当前对制备硫酸多粘菌素B单组分的方法以及适合大规模工业化生产的硫酸多粘菌素B单组分的方法存在必要性。