[发明专利]一种从发酵液中提取高纯度高含量硫酸多粘菌素B单组分的方法

权利要求书

1.一种从发酵液中提取高纯度高含量硫酸多粘菌素B单组分的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将发酵液用1M盐酸溶液或1M硫酸溶液调节pH的范围为1.5-3.0，板框过滤后得到过滤液；

（2）向过滤液中加入草酸，再加入碱液调节过滤液的pH，再过滤除钙，得到除钙液；采用的碱液为1-2 M的NaOH溶液调节pH值至3.0-5.0，过滤温度为15-25 ℃；

（3）将除钙液用阳离子交换树脂吸附、洗杂、洗脱，得到洗脱液，阳离子交换树脂为凝胶型阳离子交换树脂或大孔型阳离子交换树脂，树脂吸附产品量为30 g/L-100 g/L，所述洗杂溶剂为0.01-0.05 mol/L的硫酸水溶液，洗脱溶剂为0.10-0.40 mol/L的硫酸水溶液；

（4）将洗脱液用液碱调节至pH值为2.0-3.0，通过活性炭脱色，过滤得到脱色液，其中活性炭为酸碳或中性碳，所述活性炭的添加量为洗脱液中硫酸多粘菌B质量的5 %-40 %；

（5）调节脱色液的pH至3.0-5.0后进行上柱，采用上中低压分离柱对脱色液进行各组分单体分离，分别收集得到硫酸多粘菌素B各组分B1、B1-I、B2和B3洗脱液；所述中低压分离柱的填料为C4、C8、C18或非极性大孔树脂，填料吸附产品量为5 g/L-30 g/L；所述洗脱剂为pH2.0-3.0的无水硫酸钠-磷酸缓冲液：乙腈=75-85:25-15或pH 2.0-3.0的无水硫酸钠-磷酸缓冲液：甲醇=40-50:60-50；所述中低压分离柱压为0.5-3.0 Mpa，出口设置紫外检测，检测波长为215 nm，常温下根据出峰收集不同时段的组分，所述目标组分为B1单体、B2单体、B3单体和B1-I单体；

（6）将得到的各组分洗脱液分别加入液碱调节pH至11.0-13.5，结晶析出，过滤，对滤饼水洗除盐，得到各组分的结晶湿粉；所述结晶温度为15-35 ℃，滤饼水洗量为滤饼重量的20-50倍；

（7）将得到的结晶湿粉用硫酸溶解分别得到多粘菌素B1、B2、B3和B1-I硫酸盐溶解液；结晶湿粉用1-2 M硫酸分别溶解各单体，得到单体浓度为50-150 g/L的单体溶解液；

（8）将得到的各组分硫酸盐溶解液进行干燥，即得硫酸多粘菌素B各组分成品。

2. 根据权利要求1所述的一种从发酵液中提取高纯度高含量硫酸多粘菌素B单组分的方法，其特征在于：所述步骤（1）中的pH为 2.0-2.5。

3.根据权利要求1所述的一种从发酵液中提取高纯度高含量硫酸多粘菌素B单组分的方法，其特征在于：所述步骤（2）中pH值为3.0-3.5。

4. 根据权利要求1所述的一种从发酵液中提取高纯度高含量硫酸多粘菌素B单组分的方法，其特征在于：所述步骤（3）中树脂型号为D001、D113、D152、C105、C106中一种；树脂吸附产品量为50 g/L -70 g/L；洗杂溶剂为0.02-0.03 mol/L的硫酸水溶液；洗脱溶剂浓度为0.15-0.30 mol/L的硫酸水溶液。

5. 根据权利要求1所述的一种从发酵液中提取高纯度高含量硫酸多粘菌素B单组分的方法，其特征在于：所述步骤（4）中的活性炭为303或301酸性活性炭；活性炭的添加量为洗脱液中硫酸多粘菌B质量的15 %-30 %；洗脱液的pH值为2.5-3.0。

6. 根据权利要求1所述的一种从发酵液中提取高纯度高含量硫酸多粘菌素B单组分的方法，其特征在于：所述步骤（5）中脱色液的pH为4.0-5.0；所述中低压分离柱的填料C8或C18；填料吸附产品量为10-20 g/L；所述洗脱剂为pH 2.0-3.0的无水硫酸钠-磷酸缓冲液：乙腈=75-85:25-15。

7. 根据权利要求1所述的一种从发酵液中提取高纯度高含量硫酸多粘菌素B单组分的方法，其特征在于：所述步骤（6）中液碱调节pH范围12.0-13.0；结晶温度为15-20 ℃；滤饼水洗量为滤饼重量的25-35倍。