[发明专利]一种用于肿瘤标志物CYFRA21-1 SERS检测的免疫生物芯片及其制备方法

说明书

一种用于肿瘤标志物CYFRA21‑1SERS检测的免疫生物芯片及其制备方法，该芯片包括位于上层的SERS探针和位于下层的免疫基底；制备方法为：采用MB标记AuNRs@Ag，活化后再修饰上CYFRA21‑1A抗体得到SERS探针；在Fesubgt;3/subgt;Osubgt;4/subgt;@GO基底上修饰CYFRA21‑1B抗体，然后识别不同浓度的CYFRA21‑1得到Fesubgt;3/subgt;Osubgt;4/subgt;@GO免疫基底；将Fesubgt;3/subgt;Osubgt;4/subgt;@GO免疫基底浸入到SERS探针中，室温下孵育，用PBS清洗掉未连接的SERS探针，得到免疫生物芯片。该芯片特异性强，能对基底上吸附的CYFRA21‑1特异性识别，可应用于CYFRA21‑1的高效灵敏检测，提升SERS的灵敏度和选择性。

技术领域

本发明属于肿瘤检测技术领域，具体涉及一种用于肿瘤标志物CYFRA21-1 SERS检测的免疫生物芯片及其制备方法。

背景技术

癌症在早期往往是无症状的，生物样本中肿瘤标志物的浓度往往极低。现有的电化学传感器仍然不够灵敏，无法进行早期诊断。有必要设计和开发高灵敏度的生物传感材料和设备，以早期发现肿瘤标志物，并识别癌前病变和转移前恶性肿瘤。

CYFRA21-1目前被认为是一种主要用于检测肺癌的肿瘤标志物，尤其对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的诊断具有重要价值。如果肺部存在不清晰的环形阴影，同时血清CYFRA21-1浓度大于30ng/ml，原发性支气管肺癌的可能性非常高。各类非小细胞肺癌阳性检出率为70％～85％。CYFRA21-1的血清浓度水平高低与肿瘤临床分期正相关，也可作为肺癌手术和放化疗后追踪早期复发的有效指标。CYFRA21-1的血清高浓度水平提示疾病处于进展期和预后不良。质量成功的标志是CYFRA21-1的血清浓度迅速下降，反之则表示病灶未完全清除。血清水平下降后又升高，则提示疾病复发。但是，CYFRA21-1阴性也不能排除存在肺癌的可能。CYFRA21-1对各型肺癌诊断的敏感性依次为：鳞癌腺癌大细胞癌小细胞癌。另外，CYFRA21-1对其他肿瘤，如侵袭性膀胱癌、头颈部、乳腺、宫颈、消化道肿瘤均有一定的阳性率。

目前用于检测CYFRA21-1的传统方法主要有酶联免疫吸附法、流动荧光法、荧光法、表面等离子体共振分析法、伏安法和免疫放射测定法，这些方法由于存在设备成本高、线性范围窄等问题限制了它们的应用。

表面增强拉曼散射(SERS)是一种振动光谱技术，已被证明是检测疾病生物标志物最敏感的分析方法之一。SERS是基于贵金属银或金的增强拉曼光谱。与传统的拉曼光谱不同，它具有灵敏度高、化学特异性强、拉曼光谱带窄等特点。它能将拉曼信号增强到10⁴-10⁷幅值，对单分子检测灵敏度高。SERS已被证明是一种超灵敏且应用广泛的检测方法。由于SERS的独特性能，SERS已被许多研究者用于肿瘤标志物的超灵敏检测，特别是用于蛋白质和基因的检测。目前，还未见有用于肿瘤标志物CYFRA21-1 SERS检测的文献报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于肿瘤标志物CYFRA21-1 SERS检测的免疫生物芯片及其制备方法，该方法制备得到的芯片特异性强，能对Fe₃O₄@GO免疫基底上吸附的CYFRA21-1特异性识别，能排除其他与CYFRA21-1结构相似物质的干扰，可应用于CYFRA21-1的高效灵敏检测，提升SERS的灵敏度和选择性。

为实现上述目的，本发明提供了一种用于肿瘤标志物CYFRA21-1 SERS检测的免疫生物芯片，该芯片包括位于上层的SERS探针和位于下层的免疫基底，所述SERS探针是标记MB和修饰CYFRA21-1A抗体的AuNRs@Ag，所述免疫基底是表面修饰CYFRA21-1B抗体和CYFRA21-1的Fe₃O₄@GO免疫基底。