[发明专利]一种用于肿瘤标志物CYFRA21-1 SERS检测的免疫生物芯片及其制备方法

权利要求书

1.一种用于肿瘤标志物CYFRA21-1SERS检测的免疫生物芯片，其特征在于，该芯片包括位于上层的SERS探针和位于下层的免疫基底，所述SERS探针是标记MB和修饰CYFRA21-1A抗体的AuNRs@Ag，所述免疫基底是表面修饰CYFRA21-1B抗体和CYFRA21-1的Fe₃O₄@GO免疫基底。

2.一种如权利要求1所述的用于肿瘤标志物CYFRA21-1SERS检测的免疫生物芯片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)SERS探针的制备：采用MB标记AuNRs@Ag，活化后再修饰上CYFRA21-1A抗体得到SERS探针；

(2)Fe₃O₄@GO免疫基底的制备：在Fe₃O₄@GO基底上修饰CYFRA21-1B抗体，然后识别不同浓度的CYFRA21-1，得到Fe₃O₄@GO免疫基底；

(3)免疫生物芯片的制备：将步骤(2)获得的Fe₃O₄@GO免疫基底浸入到步骤(1)得到的SERS探针中，室温下孵育2h，接着用浓度为0.01M的PBS清洗掉未连接的SERS探针，得到用于肿瘤标志物CYFRA21-1SERS检测的免疫生物芯片。

3.根据权利要求2所述的一种用于肿瘤标志物CYFRA21-1SERS检测的免疫生物芯片的制备方法，其特征在于，步骤(1)的具体步骤如下：

(1-1)将0.1mL浓度为0.01M的MB溶液与0.9mL浓度为2.36mg/mL的AuNRs@Ag溶液混合，以250rpm的转速旋转2h，然后以8000rpm的转速离心10min并洗涤数次后分散于1mL浓度为0.01M的PBS溶液中，得到MB标记的AuNRs@Ag纳米棒分散液；

(1-2)将50μL浓度为100mM的EDC和80μL浓度为100mM的NHS加入到1mL MB标记的AuNRs@Ag纳米棒分散液中，在室温下低速摇晃30min，然后用0.01M的PBS洗涤两次，再分散到1mL浓度为0.01M的PBS中，得到活化后的MB标记的AuNRs@Ag纳米棒分散液；

(1-3)向活化后的MB标记的AuNRs@Ag纳米棒分散液中加入100μL浓度为100μg/mL的抗CYFRA21-1A，于4℃下孵育12h，再加入50μL、浓度为3％的BSA作为阻断剂，于4℃下孵育6h，离心后分散在1mL浓度为0.01M的PBS中，得到SERS探针。