[发明专利]一种用于多样品pooling建库的接头、试剂盒及建库方法

说明书

本发明公开了一种用于多样品pooling建库的接头、试剂盒及建库方法，所述接头包括接头正链和接头负链，所述接头正链的序列如SEQ ID NO.1所示，所述接头负链的序列如SEQ ID NO.2所示；所述接头正链和接头负链在退火后形成双链接头。本发明方案的通过对接头设计两级标签，在有效节约接头合成成本的基础上，极大地增加了可用接头数量，为大规模样品pooling测序提供足够多的接头，有效地解决多样品pooling测序时常发生的接头数量不足的问题，4‑8bp的内层标签序列的不等长接头，可用于但不限于普通PCR产物测序、多重PCR产物测序、基因编辑体后代大规模测序鉴定低深度重测序等二代测序文库构建。

技术领域

本发明属于高通量测序技术领域，具体涉及一种用于多样品pooling建库的接头、试剂盒及建库方法。

背景技术

高通量测序技术已经成为生命科学领域最重要的分子生物学分析方法之一，不仅为基因组遗传信息解码、基因表达调控、物种遗传进化等生命科学基础研究提供了重要数据，而且在动植物的种质资源鉴定与分子育种、人类疾病的基因诊断与基因治疗、传感染类细菌或病毒的鉴定与检测、环境检测与治理等多个领域或场景中发挥着越来越重要的作用。

相关技术有基于MGI测序平台进行高通量测序，利用经片段化的DNA片段，使用泡状接头在片段化DNA片段两端连接上建库接头；每8个连接产物等体积混合后，进行磁珠双选，选择进行下一步建库的目标片段区间；磁珠双选产物进行低循环数PCR扩增，形成目标片段区间两侧带有测序引物结合序列、环化引物结合序列的测序文库结构；PCR产物等量混合后进行环化反应，再使用外切酶ExoⅠ、ExoⅢ对环化产物进行消化，去除未环化的单链、双链DNA，从而完成环化文库制备。在此技术中，建库接头上带有10个碱基长度的Barcode标签序列，官方共发布有192个Barcode标签可供使用；通过接头连接之后，每个样品由此带有一个独特序列的Barcode标签；文库测序后，在每条测序lane里面，通过Barcode标签序列的识别即可从中抽取出对应样品的测序数据，一条测序lane可以识别区分1-96个样品的测序数据。但是，相关技术只在建库接头上设计了Barcode标签，总数为96、128、192等；一条测序lane至多只能区分192个样品的测序数据，满足不了更多样品同时放入1条lane或1张芯片中进行测序的需求；基于相关技术的官方建库接头，只能对片段化后同一位置的碱基不相同的DNA片段进行文库构建。如果需要进行建库的DNA片段在一定区域的基因序列是相同的，则会导致在测序过程中需要增加暗反应，增加测序成本，或是直接导致测序仪报错，测序失败，此类型的DNA片段包括但不限于：同一PCR引物扩增的产物、限制性内切酶产生的DNA片段等。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种用于多样品pooling建库的接头。

本发明还提出一种用于MGI平台建库的试剂盒。

本发明还提出一种二代测序文库的构建方法。

根据本发明的一个方面，提出了一种用于多样品pooling建库的接头，所述接头包括接头正链和接头负链，所述接头正链的序列如SEQ ID NO.1所示，所述接头负链的序列如SEQ ID NO.2所示；所述接头正链和接头负链在退火后形成双链接头。

在本发明的一些实施方式中，在接头正链的序列的第39位至第46位的N为Barcode标签的正向序列，长度为4-8个碱基。

在本发明的一些实施方式中，在接头负链的序列的第3位至第10位的N为Barcode标签的反向互补序列，长度为4-8个碱基。

在本发明的一些实施方式中，所述Barcode标签的序列包括SEQ ID NO.6-SEQ IDNO.53中的至少一种。

根据本发明的第二方面，提出了一种用于MGI平台建库的试剂盒，所述试剂盒包括上述接头。