[发明专利]一种用于多样品pooling建库的接头、试剂盒及建库方法

权利要求书

1.一种用于多样品pooling建库的接头，其特征在于，所述接头包括接头正链和接头负链，所述接头正链的序列如SEQ ID NO.1所示，所述接头负链的序列如SEQ ID NO.2所示；所述接头正链和接头负链在退火后形成双链接头。

2.根据权利要求1所述的接头，其特征在于，所述接头正链的序列的第39位至第46位的N为Barcode标签的正向序列，长度为4-8个碱基，所述接头负链的序列的第3位至第10位的N为Barcode标签的反向互补序列，长度为4-8个碱基。

3.根据权利要求2所述的接头，其特征在于，所述Barcode标签的序列包括SEQ IDNO.6-SEQ ID NO.53中的至少一种。

4.一种用于MGI平台建库的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-3任一项所述的接头。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括通用引物，所述通用引物的序列如SEQ ID NO.3所示。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括Index Primer，所述Index Primer的序列如SEQ ID NO.4所示。

7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括splint oligo，所述splint oligo的序列如SEQ ID NO.5所示。

8.一种二代测序文库的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：将权利要求1-3任一项所述的接头与片段化DNA进行连接，得到带接头DNA片段；对所述带接头DNA片段进行PCR扩增，得到测序文库。

9.根据权利要求8所述的构建方法，其特征在于，在将接头与片段化DNA进行连接之前，还包括将接头的两条序列进行退火的步骤；优选地，所述退火的程序为92～98℃孵育2～5min，每85～95sec下降0.8～1.2℃，至温度为20～28℃。

10.根据权利要求8所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法还包括对测序文库进行环化的步骤。