[发明专利]一种用于禽类原始生殖细胞建系的成纤维细胞生长因子组合

说明书

本发明公开了成纤维细胞生长因子的组合在禽类原始生殖细胞建系中的应用，所述成纤维细胞生长因子的组合为酸性成纤维细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子。利用含有该生长因子组合的培养体系培养原始生殖细胞可提高禽类雌性原始生殖细胞的建系效率，并且该生长因子组合适用于此前从未培养成功的野生鸟类的原始生殖细胞。

技术领域

本发明属于禽类养殖领域，具体涉及一种用于禽类原始生殖细胞建系的成纤维细胞生长因子组合。

背景技术

Marie-Cecile van der Lavoir博士在2006年于《自然》杂志上发表了关于鸡原始生殖细胞(Primordial Germ Cell，PGC)长期培养的文章。该鸡原始生殖细胞的体外培养体系主要成分为：KO-DMEM、胎牛血清(FBS)、鸡血清、非必需氨基酸、GlutaMAXTM、丙酮酸、β-巯基乙醇、重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)、人干细胞因子(human SCF)。现在，利用这个培养体系，很多实验室可以实现雄性PGC的长期培养并进行转基因研究。

成纤维细胞生长因子(Fibroblast Growth Factor，FGF)是由与细胞增殖、生长和分化有关的一系列蛋白质组成的家族(FGF家族)。FGF家族至少有20个成员，命名为FGF-1到FGF-20，其中FGF-1和FGF-2常被称为酸性FGF(acidic FGF，aFGF)和碱性FGF(basic FGF，bFGF)。

利用以上培养体系以及其他类似的培养方法对禽类PGC进行培养时，对雄性PGC的长期培养效率较高，但是对雌性PGC的长期培养效率很低。而且，对鸟类PGC的长期培养只在鸡中有成功的报道，在除鸡以外的家禽和野生鸟类未见成功。

因此，本领域亟需一种能够培养禽类PGC的方法，特别是一种能够培养禽类雌性PGC的方法。

发明内容

如前所述，本领域需要一种PGC的培养体系以提高雌性PGC的培养效率。

本发明人通过比较培养体系中不同FGF组合对PGC的培养效率的影响，发现组合使用酸性成纤维细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子可以提高禽类雌性PGC的培养效率。由此，实现了本发明。

在第一方面，本发明提供了成纤维细胞生长因子的组合在禽类原始生殖细胞建系中的应用，所述成纤维细胞生长因子的组合为酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的组合。

在第二方面，本发明提供了一种用于培养禽类原始生殖细胞的培养体系，所述培养体系包含酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、以及任选的干细胞因子(SCF)。

在第三方面，本发明提供了一种禽类原始生殖细胞建系的方法，所述方法包括使用第二方面所述的培养体系培养禽类原始生殖细胞的步骤。

本发明的有益效果是：组合使用酸性成纤维细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子可以提高禽类雌性PGC的培养效率。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1示出实施例1中从中华鹧鸪生殖新月组织分离PGC进行细胞建系的过程。

图2示出实施例2中绿色荧光蛋白PGC多克隆细胞系(GFP-PGC)在受体鸡胚性腺中的迁移和定居。

图3示出实施例3中在FGF-2+FGF-1培养条件下肉鸡种鸡PGC细胞系的形态，其中图A示出雄性肉鸡的细胞系，图B示出雌性肉鸡的细胞系。

具体实施方式