[发明专利]一种牛多杀性巴氏杆菌外膜囊泡及其制备方法与应用在审
| 申请号： | 202310129089.0 | 申请日： | 2023-02-17 |
| 公开（公告）号： | CN116333921A | 公开（公告）日： | 2023-06-27 |
| 发明（设计）人： | 李劼;高洁;刘文香;李化生;张立华;张慧;穆杨 | 申请（专利权）人： | 金宇保灵生物药品有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;A61K39/102;A61K35/74;A61P31/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 魏志恒 |
| 地址： | 010111 内蒙古自治区呼和浩*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种牛 多杀性巴氏 杆菌 外膜囊泡 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种牛多杀性巴氏杆菌外膜囊泡，其特征在于，所述外膜囊泡为夹膜B群牛多杀性巴氏杆菌CVCC44502株分泌。
2.根据权利要求1所述的牛多杀性巴氏杆菌外膜囊泡，其特征在于，所述外膜囊泡具有双层膜结构的囊泡状小体，携带细菌外膜和周质成分，包括酶、毒力因子、细菌特异性抗原和多种病原相关分子模式。
3.根据权利要求1所述的牛多杀性巴氏杆菌外膜囊泡，其特征在于，所述外膜囊泡粒径在200nm以内，蛋白条带大小集中在33KDa-45 KDa之间。
4.如权利要求1-3任一所述牛多杀性巴氏杆菌外膜囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将荚膜B群牛多杀性巴氏杆菌CVCC 44502株培养到稳定期，得到菌液；
(2)将菌液10000rpm/min，4℃，离心10min，取上清过0.45μm滤膜；
(3)将过滤后的上清经两次超高速离心，取沉淀经PBS重悬过0.22μm滤膜，得牛多杀性巴氏杆菌外膜囊泡。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述培养条件为37±1℃，时间为18-22h。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述两次超高速离心具体为上清液超高速离心，42000rpm/min，4℃，离心2h，弃上清；用PBS缓冲液重悬沉淀，将重悬液进行第二次超高速离心，42000rpm/min，4℃，离心2h，弃上清。
7.一种预防多杀性巴氏杆菌病的疫苗，其特征在于，包括权利要求1-3任一所述的牛多杀性巴氏杆菌外膜囊泡。
8.根据权利要求7所述的预防多杀性巴氏杆菌病的疫苗，其特征在于，所述牛多杀性巴氏杆菌外膜囊泡的浓度为50μg/mL。
9.根据权利要求7所述的预防多杀性巴氏杆菌病的疫苗，其特征在于，所述疫苗在-80℃环境下冻存。
10.权利要求1-3任一所述牛多杀性巴氏杆菌外膜囊泡在预防多杀性巴氏杆菌病中的应用。
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