[发明专利]一种辣椒根结线虫抗性基因Me1紧密连锁的KASP分子标记及应用

说明书

本发明涉及植物分子遗传育种技术领域，具体涉及一种辣椒根结线虫抗性基因Me1紧密连锁的KASP分子标记及应用。所述辣椒根结线虫抗性基因Me基因簇位于辣椒9号染色体上28cM区域，发现KASP标记Pep‑Me1‑K54与BCsubgt;1/subgt;群体中单株抗感表型最吻合，该标记与Me1基因重组率为3.13％，遗传距离为1.6cM，所述分子标记包括两条前引物A1、A2和一条共用后引物C。本发明发现基于KASP分型技术针对辣椒根结线虫抗性基因Me1的KASP类型分析标记，利用该分子标记可不通过辣椒根结线虫病抗性人工接种鉴定，只在苗期对辣椒植株的DNA检测，就可以对辣椒根结线虫病抗性基因进行判断，进一步地提高了根结线虫抗病辣椒品种的鉴定效率，可广泛应用到分子标记辅助育种。

技术领域

本发明涉及植物分子遗传育种技术领域，特别涉及一种辣椒根结线虫抗性基因Me1紧密连锁的KASP分子标记及应用。

背景技术

根结线虫是引起作物减产的主要病原物，多发生在热带、亚热带和暖温带地区。专性寄生于寄主的根、块茎及球茎部位。根结线虫是辣椒产区中极难防治的土传性病害，根结线虫受温度影响尤其明显，一般来说最适生长温度是25～30℃，因此，根结线虫主要在南方地区危害辣椒生产。随着北方辣椒保护地种植面积不断扩大，根结线虫在北方也逐渐开始危害辣椒生产。利用线虫抗病基因并培育抗病辣椒品种是防止根结线虫最有效的方法。

目前在辣椒中发现的抗病基因主要有7个，分别是N，Me1，Me2，Me3，Me4，Me7和Mech1。其中Me1具有广谱抗性，应用价值较大。Me1基因从辣椒材料PM217中发现，随后将该基因转育到PM217与Yolo Wonder杂交获得的DH(双单倍体)群体中的材料DH330中。分子标记辅助育种基于基因型筛选种质资源，避免或降低表型选择的误差，能大大提高育种效率。开发根结线虫抗病基因连锁标记，有助于加速抗根结线虫辣椒品种的培育。目前已开发了许多与根结线虫抗病基因Me1连锁的分子标记，如SCAR标记、SSR标记等。

KASP(KompetitiveAlleleSpecific PCR，竞争性等位基因特异性PCR)分型技术是近年来开发的可对基因组中SNPs和特定位点上的InDels进行精准基因型分型，具有灵敏度高、高通量、低成本、快速等优点，但是目前还没有发现基于KASP分型技术的专门针对辣椒根结线虫抗性基因Me1的KASP类型分子标记。

因此，一种辣椒根结线虫抗性基因Me1紧密连锁的KASP分子标记及应用的技术有待进一步研究。

发明内容

本发明旨在解决上述问题，提供了一种辣椒根结线虫抗性基因Me1紧密连锁的KASP分子标记及其在鉴定辣椒根结线虫抗病辣椒品种中的应用以及鉴定方法，该鉴定方法的准确率高，效率快。

一种辣椒根结线虫抗性基因Me1紧密连锁的KASP分子标记，所述辣椒根结线虫抗性基因Me基因簇位于辣椒9号染色体上28cM区域，在该28cM区域根据SNP位点信息设计KASP标记，在双亲中进行多态性筛选，筛选获得4对KASP标记，在双亲中具有明显多态性，将4个KASP标记在BC₁群体进行基因型分型，发现KASP标记Pep-Me1-K54与BC₁群体中单株抗感表型最为吻合，该标记与Me1基因重组率为3.13％，遗传距离为1.6cM；

该分子标记前的引物包括两条前引物A1、A2和一条共用后引物C；

所述前引物A1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示为：

5′-CATTTAAATGCAATTTGTTTCCCAAGCTGTA-3′；

所述前引物A2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示为：

5′-CATTTAAATGCAATTTGTTTCCCAAGCTGTC-3′；

所述后引物C的核苷酸序列如SEQ ID NO.3为：