[发明专利]一种辣椒根结线虫抗性基因Me1紧密连锁的KASP分子标记及应用

权利要求书

1.一种辣椒根结线虫抗性基因Me1紧密连锁的KASP分子标记，其特征在于：所述分子标记引物包括两条前引物A1、A2和一条共用后引物C；

所述前引物A1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述前引物A2的核苷酸序列如SEQID NO.2所示，所述后引物C的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.根据权利要求1所述的一种辣椒根结线虫抗性基因Me1紧密连锁的KASP分子标记，其特征在于：将所述前引物A1的5′端添加FAM荧光标签序列，将所述前引物A2的5′端添加HEX荧光标签序列；所述FAM荧光标签序列如SEQ ID NO.4所示；所述HEX荧光标签序列如SEQ IDNO.5所示。

3.如权利要求1或2所述的KASP分子标记在鉴定辣椒根结线虫抗病品种上的应用。

4.根据权利要求3所述的KASP分子标记在鉴定辣椒根结线虫抗病品种上的应用，其特征在于：辣椒根结线虫抗病品种的鉴定方法如下：

步骤一：检测：采用上述引物对待测辣椒后代群体材料的基因组DNA进行PCR扩增和基因分型；

步骤二：结果判断：聚合在接近X轴的显示蓝色的样本的基因型为连接FAM荧光标签序列的等位基因型，A:A基因型，为抗病材料；聚合在接近Y轴上的显示绿色的样本的基因型为连接HEX荧光标签序列的等位基因型，C:C基因型，为感病材料；中间显示红色的样本的基因型为两种等位基因的杂合型，C:A基因型，为抗病材料。

5.根据权利要求4所述的KASP分子标记在鉴定辣椒根结线虫抗病品种上的应用，其特征在于：

所述KASP标记的PCR扩增体系为4.055μL，其中DNA模板2μL，KASP V4.0 2X Master mix96/384Low Rox 2μL，引物混合液0.055μL；

所述KASP标记的PCR扩增程序为：

6.根据权利要求5所述的KASP分子标记在鉴定辣椒根结线虫抗病品种上的应用，其特征在于：所述KASP V4.0 2X Master mix 96/384Low Rox包括荧光探针A、荧光探针B、淬灭探针A和淬灭探针B；

所述荧光探针A的序列如SEQ ID NO.6所示，其5′末端连接1个荧光基团FAM；所述荧光探针B的序列如SEQ ID NO.7所示，其5′末端连接1个荧光基团HEX；所述淬灭探针A的序列如SEQ ID NO.8所示，其3′末端连接淬灭基团Q；所述淬灭探针B的序列如SEQ ID NO.9所示，其3′末端连接淬灭基团Q。

7.根据权利要求5所述的一种辣椒根结线虫抗性基因Me1紧密连锁的KASP分子标记，其特征在于：所述引物混合液体系为50μL，包含后引物C15μL，前引物A1 6μL，前引物A2 6μL和灭菌H₂O 23μL，其中引物浓度均为100μmol·L^-1。

8.根据权利要求5所述的一种辣椒根结线虫抗性基因Me1紧密连锁的KASP分子标记，其特征在于：若基因分型的检测结果不明显，可添加程序94℃20s，57℃60s，3个循环；37℃1min，再进行数据读取。

9.根据权利要求6所述的一种辣椒根结线虫抗性基因Me1紧密连锁的KASP分子标记在鉴定辣椒后代群体中根结线虫抗病材料上的应用，其特征在于：所述KASP PCR扩增反应后读数需使用Roche 480荧光定量仪，进行KASP Genotying，读取荧光数据，将数据导入软件进行基因分型，所述基因分型数据处理软件为KlusterCaller软件。