[发明专利]一种甲型流感病毒核酸检测试剂、试剂盒及应用

说明书

本申请提供一种用于检测甲型流感病毒的引物组合及试剂盒，该引物组合以M1基因上CDS区域中第79‑338位核苷酸序列作为靶标序列，制备出的甲型流感病毒检测试剂或试剂盒，灵敏度高，从试验数据看出，检测限低至100 copies/mL，有助于在感染早期病毒载量较低时检测出患者的感染情况，便于临床上在患病前期就进行医学干预；结合胶体金层析技术，检测过程无需借助仪器设备，结果直观，判读简单，而且成本低，适合在基层医疗单位推广。

技术领域

本发明涉及一种甲型流感病毒核酸检测试剂及试剂盒，属于体外诊断试剂技术领域。

背景技术

甲型流感是最常见的季节性流感（seasonal influenza），其病原体为甲型流感病毒，其为目前全球活动的主要流感病毒。甲型流感病毒属于正粘病毒科（Orthomyxoviridae），根据其表面抗原HA（haemagglutinin，血凝素）和NA（neuraminidase，神经氨酸酶）的抗原特性和序列特征可分为多种亚型，包括HA的18种抗原亚型（H1~H18）、NA的11种抗原亚型（N1~N11）。甲型流感病毒易变异，其编码HA和（或）NA的核苷酸序列容易发生突变，从而导致HA和（或）NA的抗原表位发生变化，致使人群原有的特异性免疫力失效，形成甲型流感传染性大，传播迅速，极易发生大范围流行的特点。虽然流感具有自限性，但对免疫力低下人群（如幼儿、孕妇和老年人等）仍可能造成致命危害。如果在流感发病后24~48小时内给予抗病毒治疗，可有效对抗流感。因此，甲型流感的早期快速精确诊断对于及时干预治疗和控制疾病的传播至关重要。

环介导等温扩增（Loop-Mediated Isothermal Amplification，简称LAMP）技术是一种核酸扩增新方法，针对目标基因的6个或8个区域设计4种或6种引物，在链置换DNA聚合酶的作用下以恒定温度进行反应。LAMP反应扩增效率极高，在15~60min内便可以达到10⁹~10¹⁰个数量级的扩增，可有效缩短检测时长。传统的流感病毒的检测手段，如血清学检测和抗原检测，虽然时间短、要求低，但灵敏度低，容易造成假阳性。荧光定量PCR检测方法虽然灵敏度较高，但存在仪器（荧光定量PCR仪）和场所（专业实验室和检测人员）限制，不利于推广。LAMP技术仅使用恒温就可高效扩增核酸，简化了对仪器和场所的需求，可应用于快速诊断。

现有技术中，中国专利CN113106089A，公开了一种使用LAMP技术检测甲型流感的引物探针组合及恒温扩增试剂盒，其检测灵敏度为500 copies/mL；中国专利CN101818207A公开了一种包含甲型流感H1N1检测的引物探针及试剂盒，但该专利仅能检测H1N1亚型的流感病毒，且检测限为7750 copies/mL。因此，为了实现甲型流感的早期快速精确诊断和及时治疗，需进一步提高检测灵敏度。

发明内容

本发明为了解决现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供了一种甲型流感病毒核酸检测试剂及试剂盒，能对甲型流感病毒进行快速检测，且灵敏度高。

为解决上述技术问题，本发明的第一个目的是，提供一种用于检测甲型流感病毒靶标序列的引物组合在制备甲型流感病毒核酸检测试剂中的应用。本发明选择甲型流感病毒序列中高度保守的基质蛋白（Matrix protein 1，后简称M1）的编码区CDS序列作为靶标序列，公开了该引物组合的序列。具体地，所述靶标序列为甲型流感病毒M1基因上CDS区域中第79-338位核苷酸序列，其中，F3区为第79-101位核苷酸序列，F2区为第122-143位核苷酸序列，F1区为第173-196位核苷酸序列，B1c区为第221-242核苷酸序列，B2c区为第276-297核苷酸序列，B3c区为第317-338位核苷酸序列；