[发明专利]一种定量检测D-二聚体的试剂盒的制备方法与应用

权利要求书

1.一种定量检测D-二聚体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测卡，所述检测卡包括卡壳和试纸条，所述试纸条包括PVC底板，所述PVC底板上依次搭接的样品垫、标记垫、缓冲垫、硝酸纤维素膜及吸水纸；

其中，所述标记垫上吸附有稀土Eu³⁺荧光微球，微球标记有D-二聚体单克隆抗体1以及羊抗鸡IgY抗体；

所述硝酸纤维素膜上依次设有检测线和质控线，其中，所述检测线处包被有D-二聚体单克隆抗体2，所述质控线处包被有鸡IgY抗体。

2.根据权利要求1所述定量检测D-二聚体的试剂盒，其特征在于，所述标记垫采用如下步骤制得：

(1)稀土Eu³⁺荧光微球同时标记抗D-二聚体单克隆抗体1和羊抗鸡IgY抗体，获得抗D-二聚体抗体1和羊抗鸡IgY抗体双标记Eu³⁺荧光微球；

(2)将所述D-二聚体抗体1和-羊抗鸡IgY抗体双标记Eu³⁺荧光微球按质量比(0.01-0.2)：1加入标记稀释液中均匀混合，获得荧光标记混合液；

(3)通过非接触式喷金仪将所述荧光标记混合液喷到目标玻璃纤维膜上，将所述玻璃纤维膜进行37-60℃12-24h干燥处理，获得所述标记垫。

3.根据权利要求1所述的定量检测D-二聚体的试剂盒，其特征在于，所述样品垫采用如下步骤制得：

(1)将玻璃纤维膜浸泡于样品垫处理液中进行浸润处理，使其具有拦截干扰物、调节pH、提高储存稳定性的作用；

(2)将浸润处理后的所述玻璃纤维膜进行37-60℃烘箱干燥12-24h处理，获得所述样品垫；

所述样品垫上包被有兔抗人红细胞多克隆抗体及阻断剂，能够过滤全血样本中红细胞及阻断干扰物质的非特异性干扰；

所述兔抗人红细胞多克隆抗体的浓度为0.01-0.1mg/mL，所述阻断剂为菲鹏生物股份有限公司M005、M009、R001、R009阻断剂，南京京达生物技术有限公司HBR-5、HBR-7阻断剂，广州万孚生物技术股份有限公司鼠IgG的一种或多种组合。

4.根据权利要求根据权利要求3所述的定量检测D-二聚体的试剂盒，其特征在于，所述样品垫处理液包括0.4％～0.6％曲拉通X-305，0.2％～0.5％酪蛋白酸钠，1.5％～5％海藻糖，0.01～0.03M Tris·HCl缓冲溶液。

5.根据权利要求2所述的定量检测D-二聚体的试剂盒，其特征在于，所述标记稀释液包括0.5～2.0％吐温-20，0.5％～2.0％酪蛋白酸钠，20％～30％海藻糖，0.01～0.05MTris·HCl缓冲溶液。

6.根据权利要求2所述的定量检测D-二聚体的试剂盒，其特征在于，所述抗D-二聚体抗体1和羊抗鸡IgY抗体双标记Eu³⁺荧光微球采用如下步骤制得：

(1)将10-100mg/mL的化学交联剂溶液加入1-20mg/mL的荧光微球溶液中进行活化；

(2)将抗D-二聚体抗体1加入步骤(1)得到的活化产物中进行反应得到抗D-二聚体抗体1-荧光微球，间隔0～60min再将羊抗鸡IgY抗体加入反应液进行反应；

(3)将封闭剂加入步骤(2)得到的溶液中进行封闭，离心，加入保存液超声得到所述荧光微球标记抗体溶液。