[发明专利]一种结核分枝杆菌的重组DNA疫苗及其制备方法在审
| 申请号： | 202310063300.3 | 申请日： | 2020-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN115969965A | 公开（公告）日： | 2023-04-18 |
| 发明（设计）人： | 徐颖;翁术锋;王洪海;赵雅敏;张天然;章金怡 | 申请（专利权）人： | 复旦大学 |
| 主分类号： | A61K39/04 | 分类号： | A61K39/04;A61P31/06;C12N15/85;C12N15/66;C12N15/62 |
| 代理公司： | 北京恒律知识产权代理有限公司 11416 | 代理人： | 任霜 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 结核 分枝杆菌 重组 dna 疫苗 及其 制备 方法 | ||
1.Ag85B基因、Rv2029c基因和Rv1738基因在制备治疗结核病的重组DNA疫苗中的应用。
2.Ag85B基因、Rv2029c基因和Rv1738基因在制备诱导巨噬细胞分泌IL-6和TNF-α的重组DNA疫苗中的应用。
3.Ag85B基因、Rv2029c基因和Rv1738基因在制备诱导淋巴细胞分泌IL-2，IFN-γ和TNF-α的重组DNA疫苗中的应用。
4.根据权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，所述重组DNA疫苗通过将Ag85B基因、Rv2029c基因和Rv1738基因重组入真核表达载体获得。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述真核表达载体为pVAX1，重组DNA疫苗为Ag85B-Rv2029c-Rv1738-pVAX1。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述重组DNA疫苗的制备方法，包括以下步骤：
(1)扩增Ag85B、Rv2029c和Rv1738基因；
(2)分别用双酶切Ag85B基因和表达质粒，胶回收连接获得重组质粒；
(3)将步骤(2)获得的重组质粒转化、扩增并表达；
(4)分别用双酶切步骤(3)获得的重组质粒和Rv2029c基因，胶回收连接形成重组质粒；
(5)将步骤(4)获得的重组质粒转化、扩增并表达；
(6)分别用双酶切步骤(5)获得的重组质粒和Rv1738基因，胶回收连接形成重组质粒；
(7)将步骤(6)获得的重组质粒转化、扩增并表达，得到重组DNA疫苗。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，步骤(2)中，双酶切使用的酶是NheⅠ和HindⅢ；步骤(4)中，双酶切使用的酶是HindⅢ和EcoRⅠ；步骤(6)中，双酶切使用的酶是EcoRⅠ和NotⅠ。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，步骤(3)、步骤(5)和步骤(7)中，重组质粒在大肠杆菌中转化、扩增并表达。
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