[发明专利]白肋朱顶红丛芽增殖和体细胞发生混合途径快速繁殖方法

说明书

本发明公开了白肋朱顶红丛芽增殖和体细胞发生混合途径快速繁殖方法。本发明以白肋朱顶红“曼谷玫瑰”鳞茎为外植体，采用丛生芽增殖和体细胞发生混合途径进行其种苗快速繁殖，具体步骤包括：外植物的消毒、不定芽诱导、不定芽增殖和生根培养、叶片体细胞发生一次成苗以及试管苗移栽。外植体消毒成功率90‑95％；体细胞胚诱导培养45天时，体细胞发生率46.67‑100％，培养75天时，每个外植体能形成1.17‑4.53个生根的不定芽；移栽的成活率均可达95‑100％以上，2‑2.5年就可开花，表型与母株一致，无变异。本发明具有取材数量多，繁殖效率高等优点，能在短期内获得大量优质种苗，技术切实可行，应用价值高。

技术领域

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及白肋朱顶红‘曼谷玫瑰’丛生芽增殖和体细胞发生混合途径种苗快速繁殖方法。

背景技术

朱顶红为石蒜科朱顶红属(Hippeastrum)多年生草本植物，花朵美观、色彩丰富、花姿优美，适于室内盆栽观赏，也可用于庭院栽培或配植花坛，还可做为切花，具有极高的观赏价值和市场前景。白肋朱顶红是朱顶红中独特的类群，它的叶片中间有一条白色的中肋，观赏价值高，特别是它的花期与绿叶朱顶红不同，绿叶朱顶红花期多在4-5月，白肋朱顶红多在10-11月。‘曼谷玫瑰’朱顶红是白肋朱顶红中最具观赏价值的品种之一，近年来从国外引进，种苗价格高，严重影响了它的应用与推广。组织培养繁殖技术具有繁殖效率高、性状稳定、短期内能获得大量种苗的优点，朱顶红的组织培养多以鳞片作为外植体经不定芽诱导和丛生芽增殖为主要再生方式，但‘曼谷玫瑰’朱顶红采用此方式繁殖时，增殖系数较低，效率不高。本发明以白肋朱顶红‘曼谷玫瑰’鳞茎为外植体体，采用丛生芽增殖和体细胞发生混合途径进行其种苗快速繁殖，具有取材数量多，繁殖效率高等优点，能在短期内获得大量优质种苗。

目前，国内外虽已有朱顶红组织培养和体细胞再生研究的报道，但没有白肋类朱顶红不定芽增殖和叶片体细胞再生混合途径快速繁殖技术的报道。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供白肋朱顶红‘曼谷玫瑰’优质种苗高效繁殖的方法，从而进行其种苗的规模化生产。

本发明提供白肋朱顶红丛芽增殖和体细胞发生混合途径快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.外植物的消毒：选择已开过花的白肋朱顶红优良株系侧生的小鳞茎为材料，去除叶片和根系后将鳞茎盘切下，分成8-16块，带长度为2-3厘米的鳞片，消毒处理后，切掉鳞片上端，留下1-2厘米鳞片的鳞茎盘作为外植体；

b.不定芽诱导：将外植体接种到不定芽诱导培养基进行初代培养，培养30-40天长出1-4个不定芽后，及时转移，所述不定芽诱导培养基每升含有6-苄基嘌呤2-6毫克，蔗糖20-30克，琼脂4.5-5.0克，余量为MS培养基，pH值为5.8-6.0(其配制方法是将成分混合均匀，调pH值，灭菌)；

c.不定芽增殖和生根培养：将初代形成的不定芽继代在不定芽增殖培养基，培养25-30天形成2-4个丛生芽后转接至不定芽增殖培养基进行继代培养，或将不定芽切成单芽后接种到生根培养基进行生根培养；

所述不定芽增殖培养基每升含有6-苄基嘌呤2-8毫克，蔗糖20-30克，琼脂4.5-5.0克，余量为MS培养基，pH值为5.8-6.0(其配制方法是将成分混合均匀，调pH值，灭菌)；

所述生根培养基每升含有吲哚丁酸0.5-2毫克或萘乙酸0-2毫克，蔗糖40-60克，琼脂4.5-5.0克，余量为MS培养基，pH值为5.8-6.0(其配制方法是将成分混合均匀，调pH值，灭菌)；