[发明专利]白肋朱顶红丛芽增殖和体细胞发生混合途径快速繁殖方法

权利要求书

1.白肋朱顶红丛芽增殖和体细胞发生混合途径快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.外植物的消毒：选择已开过花的白肋朱顶红优良株系侧生的小鳞茎为材料，去除叶片和根系后将鳞茎盘切下，分成8-16块，带长度为2-3厘米的鳞片，消毒处理后，切掉鳞片上端，留下1-2厘米鳞片的鳞茎盘作为外植体；

b.不定芽诱导：将外植体接种到不定芽诱导培养基进行初代培养，培养30-40天长出1-4个不定芽后，及时转移，所述不定芽诱导培养基每升含有6-苄基嘌呤2-6毫克，蔗糖20-30克，琼脂4.5-5.0克，余量为MS培养基，pH值为5.8-6.0；

c.不定芽增殖和生根培养：将初代形成的不定芽继代在不定芽增殖培养基，培养25-30天形成2-4个丛生芽后转接至不定芽增殖培养基进行继代培养，将不定芽切成单芽后接种到生根培养基进行生根培养；

所述不定芽增殖培养基每升含有6-苄基嘌呤2-8毫克，蔗糖20-30克，琼脂4.5-5.0克，余量为MS培养基，pH值为5.8-6.0；

所述生根培养基每升含有吲哚丁酸0.5-2毫克，蔗糖40-60克，琼脂4.5-5.0克，余量为MS培养基，pH值为5.8-6.0，或所述生根培养基每升含有萘乙酸0-2毫克，蔗糖40-60克，琼脂4.5-5.0克，余量为MS培养基，pH值为5.8-6.0；

d.叶片体细胞发生一次成苗：取增殖培养中获得的无菌苗叶片基部，切去两端并切成0.4-0.6厘米长的小块，接种在体细胞胚诱导培养基，进行体细胞胚胎发生并分化出芽生根，所述体细胞胚诱导培养基每升含有6-苄基嘌呤1-4毫克，萘乙酸0-2毫克，激动素1-3毫克，噻苯隆0.25-1毫克，蔗糖40-60克，琼脂4.5-5.0克，余量为MS培养基，pH值为5.8-6.0；

e.试管苗移栽：将丛生芽增殖途径和体细胞发生途径获得的试管苗培养瓶转移到自然光下炼苗5-7天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入栽培基质中培养。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的将切割后的鳞茎盘进行消毒处理具体为：将切割后的鳞茎盘浸泡在75％酒精10-30秒，用0.1％升汞溶液消毒8-10分钟，无菌水冲洗4-5次后，再用0.1％升汞溶液消毒4-5分钟，无菌水冲洗4-5次；所述的鳞茎盘在切割前用75％酒精棉擦拭干净。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，不定芽诱导培养基每升含有6-苄基嘌呤4毫克，蔗糖20克，琼脂4.8克，余量为MS培养基，pH值为5.9。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的不定芽增殖培养基每升含有6-苄基嘌呤4毫克，蔗糖20克，琼脂4.8克，余量为MS培养基，pH值为5.9。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的生根培养基每升含有吲哚丁酸0.5毫克，蔗糖40克，琼脂4.8克，余量为MS培养基，pH值为5.9。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的体细胞胚诱导培养基每升含有6-苄基嘌呤2毫克，萘乙酸2毫克，激动素2毫克，噻苯隆0.5毫克，蔗糖50克，琼脂4.8克，余量为MS培养基，pH值为5.9。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的栽培基质包括泥炭和珍珠岩，泥炭和珍珠岩体积比为2-4:1。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的栽培基质包括泥炭和珍珠岩，泥炭和珍珠岩体积比为3:1。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a-d的培养条件为温度25±2℃，光照强度为1500-2500lx，光照时间为12-16小时/天。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述步骤a-d的培养条件为温度25±2℃，光照强度为2000lx，光照时间为14小时/天。