[发明专利]PPARγ敲除细胞系的构建及作为PRRSV生产细胞系的应用

说明书

本发明属于抗病毒研究技术领域，具体涉及一种PPARγ敲除细胞系的构建及作为PRRSV生产细胞系的应用。首先，本发明意外发现，在宿主细胞中敲除PPARγ基因，能够显著促进PRRSV的复制，因此，通过抑制/干扰/沉默/敲除宿主细胞中的PPARγ基因构建的细胞系可作为PRRSV或PRRSV疫苗生产细胞系，促进PRRSV或PRRSV疫苗的生产；其次，所述PPARγ基因可作为靶点用于筛选预防或治疗PRRS的药物，用于开发预防和治疗PRRSV的药物及抗PRRSV转基因猪的研究，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于抗病毒研究技术领域，具体涉及一种PPARγ敲除细胞系的构建及作为PRRSV生产细胞系的应用。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)，俗称“猪蓝耳病”，是对全球生猪产业危害极大的重大病毒性疫病。该病的病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)，主要引起妊娠母猪繁殖障碍和各年龄阶段生长猪呼吸道疾病，给养猪业造成了重大经济损失。仅美国养猪业每年因该病造成的直接经济损失就高达6.64亿美元，对我国养猪业造成的损失超过20亿美元/年。我国于1995年首次暴发该病，2006年全国大面积暴发主要由北美型高致病性PRRS病毒(HP-PRRSV)的变异株引起的高致病性PRRS给我国养猪业造成了几乎是毁灭性的打击，2013年又出现了2008年美国分离出的NADC30样PRRSV毒株，随后又出现了各种重组毒株。由于该病毒的高变异特性和复杂的感染特征，PRRSV污染面依然很广，毒株类型复杂，目前对该病的控制并未取得实质性进展。由于PRRSV具备高变异性、毒株的多样性以及超强的免疫抑制和免疫逃逸能力等，现有的商品化疫苗无法提供令人满意的保护，这给PRRSV的有效防控带来巨大挑战。因此，急需深入研究宿主-PRRSV的相互作用机制，发掘宿主源调控病毒复制的分子，为制定安全有效的PRRSV防控策略提供新的参考。

PPARγ是过氧化物酶体增殖激活受体家族的一员，多年来在糖尿病、癌症及各类过敏性疾病中得到广泛研究。目前，已有的报道显示在人巨细胞病毒(HCMV)感染的细胞中，PPARγ能够增强病毒复制。

本发明意外发现，在宿主MARC-145细胞中敲除PPARγ基因，能够显著促进PRRSV的复制，可作为PRRSV或PRRSV疫苗生产细胞系；而且所述PPARγ基因作为靶点能用于筛选预防或治疗PRRS的药物，具有广阔的应用前景。

发明内容

针对上述技术问题，本发明的目的在于提供一种PPARγ敲除细胞系的构建及作为PRRSV生产细胞系的应用。具体包括以下内容：

第一方面，本发明提供了一种PPARγ为靶点在筛选预防或治疗猪繁殖与呼吸综合征药物中的应用，所述药物促进PPARγ表达。

第二方面，本发明提供了一种PPARγ或表达PPARγ的重组载体/质粒在制备预防或治疗猪繁殖与呼吸综合征药物中的应用。

第三方面，本发明提供了PPARγ基因敲除/缺失细胞系作为猪繁殖与呼吸综合征病毒或病毒疫苗生产细胞系的应用。

第四方面，本发明提供了抑制/沉默/干扰PPARγ基因表达的试剂在制备猪繁殖与呼吸综合征病毒或病毒疫苗生产细胞系中的应用。

优选地，所述抑制/沉默/干扰PPARγ基因表达的试剂包括特异性靶向PPARγ基因的sgRNA。

优选地，所述sgRNA的序列如下：

正义链：CACCGGGCTGCCAGTTTCGCTCCG；

反义链：AAACCGGAGCGAAACTGGCAGCCC。

第五方面，本发明提供了一种特异性靶向PPARγ基因的sgRNA，所述sgRNA的序列如下：