[发明专利]PPARγ敲除细胞系的构建及作为PRRSV生产细胞系的应用在审
| 申请号： | 202310059618.4 | 申请日： | 2023-01-19 |
| 公开（公告）号： | CN116286816A | 公开（公告）日： | 2023-06-23 |
| 发明（设计）人： | 肖书奇;郑紫方;郑海学;李洋;马志倩;李志伟;冯英桐;刘霄 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/867;C12N5/10;A61K39/12;A61K38/46;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京力量专利代理事务所(特殊普通合伙) 11504 | 代理人： | 毛婷 |
| 地址： | 730046 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | ppar 细胞系 构建 作为 prrsv 生产 应用 | ||
1.PPARγ为靶点在筛选预防或治疗猪繁殖与呼吸综合征药物中的应用，所述药物促进PPARγ表达。
2.PPARγ或表达PPARγ的重组载体/质粒在制备预防或治疗猪繁殖与呼吸综合征药物中的应用。
3.PPARγ基因敲除/缺失细胞系作为猪繁殖与呼吸综合征病毒或病毒疫苗生产细胞系的应用。
4.抑制/沉默/干扰PPARγ基因表达的试剂在制备猪繁殖与呼吸综合征病毒或病毒疫苗生产细胞系中的应用。
5.一种特异性靶向PPARγ基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的序列如下：
正义链：CACCGGGCTGCCAGTTTCGCTCCG；
反义链：AAACCGGAGCGAAACTGGCAGCCC。
6.如权利要求5所述的sgRNA在敲除/缺失PPARγ基因或在制备PPARγ基因敲除/缺失细胞系中的应用。
7.一种用于敲除PPARγ基因的试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒包括权利要求5所述的sgRNA，或靶向敲除PPARγ基因的打靶载体；所述靶向敲除PPARγ基因的打靶载体包括权利要求5所述的sgRNA和Cas9蛋白基因的编码序列。
8.一种PPARγ基因敲除/缺失细胞系，其特征在于，所述PPARγ基因敲除/缺失细胞系的构建方法为：利用CRISPR/Cas9系统，使用权利要求5所述的sgRNA敲除宿主细胞中的PPARγ基因获得。
9.一种PPARγ基因敲除/缺失的MARC-145细胞系，所述MARC-145细胞系的构建方法包括以下步骤：
(1)制备权利要求5所述的特异性靶向PPARγ基因的sgRNA；
(2)将步骤(1)制备的sgRNA退火并连接至慢病毒敲除质粒，得到同时表达Cas9蛋白基因和打靶sgRNA序列的慢病毒敲除质粒；
(3)将步骤(2)制备的慢病毒敲除质粒转染MARC-145细胞，用嘌呤霉素抗生素筛选和细胞有限稀释法获得PPARγ基因敲除/缺失的MARC-145细胞系。
10.如权利要求8或9所述的细胞系作为猪繁殖与呼吸综合征病毒或病毒疫苗生产细胞系的应用。
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