[发明专利]靶向肿瘤的幽门螺杆菌突变株及抗胃癌外膜囊泡组合物

权利要求书

1.一株靶向肿瘤的幽门螺杆菌突变株，其特征在于，所述突变株发生ΔfutB、ΔlpxE、ΔlpxF、ΔsncRNA-2509025和ΔtolB基因缺失突变，且递呈同时表达HER₂、EGFR₁和VEGF的亲和抗体。

2.根据权利要求1所述的靶向肿瘤的幽门螺杆菌突变株，其特征在于，所述突变菌株的分类命名为QS003(HelicobacteripyloriΔfutBΔlpxEΔlpxF

ΔsncRNA-2509025ΔtolBwithplasmidHbp+AffiHER₂-AffiEGFR₁-AffiVEGF)，保藏号为CCTCCM2023065，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2023年1月11日。

3.根据权利要求1所述的靶向肿瘤的幽门螺杆菌突变株，其特征在于，所述三种亲和抗体由Hbp蛋白自转运系统表达；基因futB的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，基因lpxE的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，基因lpxF的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，基因sncRNA-2509025的基因核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，基因tolB的基因核苷酸序列如SEQ IDNo.5所示，Hbp自转运系统表达盒的基因核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，肿瘤抗原HER₂的亲和抗体的基因核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，肿瘤抗原EGFR₁的亲和抗体的基因核苷酸序列如SEQ ID No.8所示，肿瘤抗原VEGF的亲和抗体的基因核苷酸序列如SEQ ID No.9所示。

4.一株靶向肿瘤的幽门螺杆菌突变株的构建方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1)通过同源重组的方法，敲除基因futB、基因lpxE和基因lpxF、基因sncRNA-2509025和基因tolB；

2)通过转入表达质粒的方法，利用Hbp蛋白自转运系统将HER₂、EGFR₁和VEGF的亲和抗体的基因表达片段构建于质粒中，并将质粒通过电转的方式转入幽门螺杆菌突变菌株中，最终构建靶向肿瘤的幽门螺杆菌突变株；

优选的，所述质粒为pYA3332模板质粒，得到的质粒为pYA3332-Hbp-HER₂-EGFR₁-VEGF；

更优选的，所述步骤2)所示的靶向肿瘤抗原的亲和抗体表达质粒的构建方法包括如下步骤：

1将来源于幽门螺杆菌自身的Hbp自转运系统表达盒利用Gibsonassembly kit组装试剂盒一步法克隆至载体pYA3332中；

2利用Gibsonassemblykit组装试剂盒将肿瘤抗原HER₂、EGFR₁和VEGF的亲和抗体的编码基因序列分别克隆至Hbp自转运系统表达盒的d1、d2和d4区域，以实现将三种亲和抗体表达至突变株外膜表面。