[发明专利]一种用于检测和鉴别布鲁氏杆菌的试剂盒与检测方法

说明书

本发明涉及一种用于检测和鉴别布鲁氏杆菌的试剂盒与检测方法。所述试剂盒包括用于检测和鉴别布鲁氏杆菌的crRNA，序列如SEQ ID NO.1～3所示；或者用于检测和鉴别布鲁氏杆菌的crDNA，序列如SEQ ID NO.4～6所示。本发明提供的用于检测和鉴别布鲁氏杆菌的试剂盒可以同时区分待测样品是牛种布鲁氏杆菌菌株、羊种布鲁氏杆菌菌株和猪种布鲁氏杆菌菌株，有效解决了现有技术中布鲁氏杆菌菌株生物种分别鉴定区分的问题，为后续布鲁氏菌病的治疗提供了明确的指导。且操作步骤简单，通过荧光颜色即可肉眼分辨出布鲁氏杆菌菌株生物种，判断布鲁氏菌病的感染来源，为布鲁氏菌病的净化提供全新的思路和方法。

技术领域

本发明涉及一种用于检测和鉴别布鲁氏杆菌的试剂盒与检测方法，属于生物检测技术领域。

背景技术

布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏杆菌(Brucella)感染引起的疾病，是一种人畜共患性全身传染病，简称布病，又有地中海弛张热、马耳他热、波浪热等称谓。布鲁氏杆菌可通过皮肤黏膜、呼吸道、消化道等途径侵入机体，引起发热、流产、不育、虚弱、关节痛等临床症状。布鲁氏杆菌宿主广泛、传染性强，不同种布鲁氏杆菌具有宿主间交叉感染的能力，对畜牧业和人类健康均构成严重威胁。因此，在当前严峻的防控形势下研发简便、快速、精确的布鲁氏杆菌检测技术就显得非常迫切。

布鲁氏杆菌(Brucella)是一种革兰氏阴性的不运动细菌，无荚膜(光滑型有微荚膜)，触酶、氧化酶阳性，绝对嗜氧菌，可还原硝酸盐，细胞内寄生，可以在很多种家畜体内存活。目前，布鲁氏杆菌属主要有7个种，分别为羊种布鲁氏杆菌(B.melitensis)、牛种布鲁氏杆菌(B.abortus)、猪种布鲁氏杆菌(B.suis)、犬种布鲁氏杆菌(B.canis)、绵羊附睾种布鲁氏杆菌、沙林鼠种布鲁氏杆菌和海洋哺乳动物种布鲁氏杆菌，一共21个生物型。人布鲁氏菌病亦呈上升趋势，人布鲁氏菌病疫情表现出明显的职业性、地区性、季节性，人布鲁氏菌病可能与接触感染动物有关。因此，必须从根本上预防和控制动物布鲁氏菌病。

一方面，传统的病原分离培养、血清学检测技术和分子生物学检测方法存在诸多局限性，如常规生化识别过程繁琐、周期长、效率低；免疫检测特异性不强，容易造成漏检；RT-PCR需要耗时、繁琐、仪器昂贵不便携带和需要专业人员操作等。另一方面，现有的布鲁氏杆菌的试剂盒虽然能够实现布鲁氏杆菌的检测，但是无法对布鲁氏杆菌的种类进行区分和鉴别。因此，亟需研发一种同时具备检测和鉴别布鲁氏杆菌的试剂盒。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种用于检测和鉴别布鲁氏杆菌的试剂盒与检测方法。

本发明技术方案如下：

一种用于检测和鉴别布鲁氏杆菌的crRNA，所述crRNA为crRNA-Me、crRNA-Ab和crRNA-Su的组合；

所述crRNA-Me的序列如SEQ ID NO.1所示；所述crRNA-Ab的序列如SEQ ID NO.2所示；所述crRNA-Su的序列如SEQ ID NO.3所示。

一种用于检测和鉴别布鲁氏杆菌的crDNA，所述crDNA为crDNA-Me、crDNA-Ab和crDNA-Su的组合；

所述crDNA-Me的序列如SEQ ID NO.4所示；所述crDNA-Ab的序列如SEQ ID NO.5所示；所述crDNA-Su的序列如SEQ ID NO.6所示。

一种用于检测和鉴别布鲁氏杆菌的DNA，所述DNA为DNA-Me、DNA-Ab和DNA-Su的组合；

所述DNA-Me的序列如SEQ ID NO.7所示；所述DNA-Ab的序列如SEQ ID NO.8所示；所述DNA-Su的序列如SEQ ID NO.9所示。