[发明专利]一种高产溶栓纳豆激酶的纳豆发酵及冻干方法

说明书

本发明公开了一种高产溶栓纳豆激酶的纳豆发酵及冻干方法，属于纳豆发酵及冻干技术领域，所述纳豆发酵及冻干方法包括如下步骤：（1）大豆预处理；（2）发酵培养基的制备；（3）纳豆芽孢杆菌活化及预培养；（4）产酶固体发酵；（5）老化；（6）真空冷冻干燥。为了解决传统发酵方式获得的纳豆激酶活性低下、发酵效果不理想的问题，本发明提出通过加入天然组分合欢皮提取物、灰树花多糖和壳聚糖等物质刺激纳豆枯草芽孢杆菌的生长，并激活纳豆枯草芽孢杆菌产酶相关基因的表达性能，显著提高了纳豆激酶的含量，本发明提供的纳豆发酵及冻干方法，方法科学，工艺合理，可用于健康无害化的不同类型不同级别的纳豆激酶制品的研发与生产。

技术领域

本发明属于纳豆发酵及冻干技术领域，具体是指一种高产溶栓纳豆激酶的纳豆发酵及冻干方法。

背景技术

纳豆，起源于中国古代，自秦汉以来开始制作，由黄豆通过纳豆菌发酵制成豆制品，具有黏性，气味较臭，味道微甜，不仅保有黄豆的营养价值、富含维生素K2、提高蛋白质的消化吸收率，更重要的是发酵过程产生了多种生理活性物质，具有溶解体内纤维蛋白及其他调节生理机能的保健作用。

纳豆激酶是是由纳豆芽孢杆菌（ Bacillus subtilis）在发酵过程中天然分泌的一种碱性丝氨酸蛋白酶，纳豆激酶具有较强的纤溶活性，可以改善血液循环、降低血粘度，而且在血液中的保存时间长、不易被胃酸分解，因而具有预防和治疗血栓相关疾病的能力；纳豆芽孢杆菌是一类好氧型、有纤溶能力的杆状细菌，能产生多种抗菌素和酶，具有广谱抗菌活性和较强的抗逆能力，应用前景广泛。

传统纳豆激酶生产方法通常直接使用纳豆芽孢杆菌进行发酵，但是发酵获得的纳豆激酶活性低下，发酵效果不理想，为此，本发明提出了一种高产溶栓纳豆激酶的纳豆发酵及冻干方法。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本发明提供了一种高产溶栓纳豆激酶的纳豆发酵及冻干方法，为了解决传统发酵方式获得的纳豆激酶活性低下、发酵效果不理想的问题，本发明对纳豆发酵培养基进行改良，提出通过加入天然组分合欢皮提取物、灰树花多糖和壳聚糖等物质刺激纳豆枯草芽孢杆菌的生长，并激活纳豆枯草芽孢杆菌产酶相关基因的表达性能，显著提高了纳豆激酶的活性及含量，同时，本发明改良了纳豆发酵及冻干工艺程序，使加工程序在保持更高的纳豆激酶含量的同时更加简约化，总之，本发明提供的纳豆发酵及冻干方法，方法科学，工艺合理，产品的质量与安全性，可用于健康无害化的不同类型不同级别的纳豆激酶制品的研发与生产。

为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：本发明提出了一种高产溶栓纳豆激酶的纳豆发酵及冻干方法，所述纳豆发酵及冻干方法包括如下步骤：

（1）大豆预处理：选择颗粒饱满、表皮完整、无霉变或虫蛀的大豆，清洗3-4次，浸泡12-24小时，直至豆粒饱胀，无硬心为准，沥干后得到预发酵大豆；

（2）发酵培养基的制备：将预发酵大豆、蔗糖、七水硫酸镁、氯化钙、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、合欢皮提取物、灰树花多糖和壳聚糖混合均匀后在蒸汽灭菌锅内蒸煮30-40分钟进行灭菌，冷却后备用；

（3）纳豆芽孢杆菌活化及预培养：所述纳豆芽孢杆菌活化为将纳豆枯草杆菌在无菌环境中用接种环采用“Z”字划线接种到纳豆芽孢杆菌活化培养基上，在35-38℃培养箱中培养24-30小时得到活化后的纳豆芽孢杆菌；所述预培养为将所述活化的纳豆芽孢杆菌在无菌环境下接种到纳豆芽孢杆菌预培养基中，在35-38℃、200r/min条件下振荡培养16-18小时获得纳豆芽孢杆菌培养菌液；

（4）产酶固体发酵：将步骤（3）中所述纳豆芽孢杆菌培养菌液均匀的接种在步骤（2）制备的发酵培养基中进行产酶固体发酵；

（5）老化：将经过步骤（4）固体发酵的纳豆置于低温环境下，老化24h获得鲜纳豆；